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背景及目的乳腺癌是世界范围内女性发病率最高的恶性肿瘤,占总癌症病例的23%和癌症死亡病例的14%。在我国,乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势,且趋于年轻化,是对妇女健康威胁最大的疾病之一。由于缺少相应的筛查措施或治疗手段不当,我国乳腺癌的死亡率也逐渐升高。因此,深入探讨乳腺癌的发病机理十分必要。随着分子生物学机制在肿瘤学领域的更深入研究,分子靶向治疗越来越多的展现出它独有的优势。沉默信息调节因子家族(Sirtuins)被认为在调控衰老和寿命方面发挥重要作用。Sirtuins由7个成员组成,即SIRT1-SIRT7。SIRT3作为线粒体去乙酰化酶,是Sirtuins家族的重要成员。最近几年的研究发现SIRT3不仅参与了机体寿命的调节,其在肿瘤的发生、发展中亦具非常重要的作用。近期研究发现:SIRT3在肝癌细胞中的表达相对于癌旁组织显著降低,且SIRT3高表达可使总生存期(OS)与RFS延长。此外,SIRT3的高表达可以抑制细胞生长并诱导肝癌细胞的凋亡。在肺腺癌,胃癌,胰腺癌中,SIRT3表达均下调,SIRT3的过表达抑制细胞生长并诱导细胞死亡。与此结果相反,另有一些研究表明:在口腔鳞癌、食管癌、膀胱癌中SIRT3敲低显著抑制肿瘤发生,起促进肿瘤进展的作用。由此发现,SIRT3在不同类型肿瘤中的作用机制有待进一步研究。目前关于SIRT3在乳腺癌中作用的研究尚不完善,本实验以SIRT3为靶点,通过免疫组织化学测定其在乳腺癌组织中的表达情况,Western blot测定SIRT3在乳腺癌细胞的表达水平,以及RT-PCR实验测定SIRT3分子在RNA水平的表达,从而探讨SIRT3在乳腺癌疾病进展中的作用;通过将SIRT3的表达情况与患者临床病理特征进行相关性分析及生存分析,探讨SIRT3与乳腺癌预后相关性;通过研究SIRT3基因的过表达与敲低条件下分别对乳腺癌细胞增殖能力的影响,探讨SIRT3在癌细胞中的功能和性质,从而探索SIRT3是否有望成为乳腺癌治疗的潜在靶点。方法1.应用组织芯片技术,通过免疫组化法检测SITR3在乳腺癌组织及癌旁组织的表达,评价SIRT3在乳腺癌组织的表达情况,并分析SIRT3的表达与患者临床病理学特征的相关性。根据随访结果对所有病例进行单因素及多因素生存分析,分析SIRT3的表达与乳腺癌患者预后的相关性。2.应用细胞培养技术,通过Western blot检测SIRT3在乳腺癌细胞系EMT6,乳腺成纤维细胞系MEFs的蛋白表达水平。3.通过荧光定量PCR检测SIRT3 mRNA在乳腺癌细胞系EMT6,乳腺成纤维细胞系MEFs的表达情况。4.通过MTT实验观察上调及下调SIRT3基因对乳腺癌EMT6细胞增殖能力的影响。结果1、SIRT3在乳腺癌组织中的阳性表达率84.72%(122/144)低于癌旁正常组织表达率96.63%(86/89)。两组差异有统计学意义(t=7.572,P<0.05)。SIRT3在乳腺癌中的表达与患者下列临床病理学特征存在相关性:年龄、淋巴结转移、TNM分期、HER-2表达(P<0.05);然而,SIRT3的表达与病理分级、浸润深度、ER受体及PR受体的表达情况无关(P>0.05)。单因素分析显示:乳腺癌中SIRT3表达、淋巴结转移、TNM分期、HER-2表达情况与预后相关(P<0.05);多因素COX比例风险分析显示SIRT3的表达情况及TNM分期均具有独立的预后意义。2、Western blot结果显示:乳腺癌细胞中SIRT3的表达水平明显降低。定量数据显示:SIRT3在乳腺癌细胞的相对表达量(0.220±0.173)明显低于非癌性细胞(0.850±0.086),差异有统计学意义(t=7.133,P=0.002,P<0.01)。3、RT-PCR结果显示:SIRT3在乳腺癌细胞的mRNA水平较非癌性细胞明显降低。SIRT3在乳腺癌细胞中的表达水平(0.520±0.069)明显低于非癌性细胞(0.886±0.034),差异有统计学意义(t=4.729,P=0.009,P<0.01)。4、MTT试验结果显示:SIRT3敲低条件下细胞增殖速度增加,明显高于对照组;SIRT3过表达条件下细胞增殖速度减慢,差异有统计学意义。结论SIRT3在乳腺癌组织和乳腺癌细胞的中的表达下调,提示SIRT3可能在乳腺癌的发生发展中起抑制作用。SIRT3的表达水平对乳腺癌的预后判断具有重要意义。上调SIRT3基因可以抑制乳腺癌细胞增殖。