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目的:通过制备99Tcm标记的survivin mRNA反义肽核酸（peptide nucleic acid,PNA）探针,并进行人肺癌A549荷瘤裸鼠的体内分布及基因显像实验,观察反义探针在荷瘤裸鼠体内分布情况及在肿瘤组织部位的放射性聚集程度,探讨基因显像早期诊断肿瘤的可行性,为核素基因显像技术在肿瘤早期诊断方面进一步临床性研究提供实验室依据。方法:选用survivin mRNA的第240-251位寡核苷酸片段为靶序列,利用化学合成法合成与其互补的反义肽核酸片段5’-CCCAGCCTTCCA-3’,于5’端连上4个氨基酸组成的短肽结构（Gly-（D）-Ala-Gly-Gly-）,形成1个类似N4结构的强螯合基团,为消除空间阻碍,引入1个γ-氨基丁酸（4-aminobutyric acid,Aba）作为隔离物,然后利用配体交换法进行99Tcm标记。以同样方法对无义肽核酸片段5’-TACCGTCTGCGA-3’进行99Tcm标记。采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）对标记物进行鉴定,测定标记物的保留时间及放射性化学纯度。以纯乙腈为展开剂,分别用聚酰胺凝胶膜和快速硅胶纸两种快速薄层层析法（instant thin-layer chromatography, ITLC）对标记物即刻标记率进行综合测定,并测定与人新鲜血清37℃保温24小时后的标记率,检测探针的体外稳定性。采用贴壁法培养人肺癌A549细胞,收获对数生长期的细胞,制备成1×107个/0.2ml生理盐水的单细胞悬液,接种到4周龄的雌性裸鼠的右前肢皮下,约14天后成瘤,待肿瘤直径长至1～1.5cm时,选取肿瘤形态规则,色泽红润,中心无坏死的荷瘤裸鼠纳入实验。利用Rt-PCR实验检测人肺癌A549细胞及肿瘤组织中survivin基因mRNA的表达情况。细胞摄取率及滞留率实验初步探讨反义肽核酸在肺癌A549细胞中的药代动力学作用。抽取30只荷瘤裸鼠,随机分为反、无义体内分布组,每组又分为1、2、4h三个亚组,各5只,每只荷瘤裸鼠经尾静脉注射99Tcm标记的survivin mRNA反义或无义PNA （740kBq/0.1ml）后,分别于1、2、4h将对应各组荷瘤裸鼠眼静脉采血,处死并解剖各组织或脏器,分别测定血液、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胃、肠道、脑、骨骼、肌肉及肿瘤等组织的重量及放射性计数,并测定相同时刻标准源的放射性计数,计算每克组织中放射性计数占标准源总放射性计数的比值（%ID/g）,计算肿瘤组织与肌肉组织的%ID/g的比值（tumor to muscle ratios, T/M）。抽取A549荷瘤裸鼠10只,随机分为反、无义两组,各5只,每只荷瘤裸鼠经尾静脉注射99Tcm标记的survivin mRNA反义或无义PNA（37MBq/0.1ml）后,进行1、2、4h上机显像,观察两组间显像的差异。利用感兴趣区技术（region of interest,ROI）测得肿瘤组织与对侧正常组织的放射性计数的比值（target to nontarget ratio, T/NT）。所有计量资料均以x±s表示,采用SPSS13.0统计学软件对组间数据进行两个样本的成组t检验,P<0.05统计学差异有显著性。结果:99Tcm-survivin mRNA反义PNA经HPLC检测标记物呈单峰,保留时间约为12分钟,与survivin mRNA反义PNA的紫外峰保留时间基本一致。两种ITLC法综合检测99Tcm-survivin mRNA反义PNA即刻标记率为95.48%±1.92%（n=5）,与人新鲜血清37℃保温24小时后标记率仍>85%。无义PNA即刻标记率及体外稳定性与反义PNA基本相同。Rt-PCR实验结果表明人肺癌A549细胞及肿瘤组织中均高表达survivin基因。细胞摄取实验结果显示A549细胞对两种肽核酸的摄取无明显统计学差异,肿瘤细胞与反义肽核酸在相互作用1h后有一个较稳定的平台期。3h内细胞对两种肽核酸都有一定的清除作用,无义组较反义组清除快,两组在60及120分钟时细胞滞留率差异有统计学意义。荷瘤裸鼠体内分布结果表明99Tcm-survivin mRNA反义PNA在肿瘤组织内分布明显高于肌肉组织。此外,肾脏和肝脏中的放射性分布最高。反义组1、2、4h肿瘤组织的%ID/g分别为2.51±1.20、1.52±0.16、1.35±0.27。计算反义、无义两组各时刻T/M值,组间结果显示4h时差异有统计学意义（t=2.506, p=0.041）。反义基因显像显示99Tcm -survivin mRNA反义PNA在肿瘤部位特异性聚集,随着时间的延长,聚集程度也相对逐渐增加,4h时肿瘤组织部位显像最清晰。利用ROI技术测得的1、2、4h小时T/NT值分别为2.70±0.28、3.44±0.35、4.21±0.63。此外荷瘤裸鼠腹腔有一定的放射性聚集。无义PNA在肿瘤部位中仅稍有放射性核素聚集,显像过程中聚集程度变化不明显。4h时反义、无义两组间T/NT值差异有统计学意义（t=2.918, p=0.019）,与体内分布中T/M比值结果相吻合。结论:99Tcm-survivin mRNA反义PNA即刻标记率高,体外稳定性好,无需纯化即可用于动物模型中体内显像,可被高表达survivin基因的人肺癌A549细胞特异性摄取,荷瘤裸鼠反义基因显像结果达到了预期的实验目的,反义肽核酸在肿瘤组织内特异性聚集,与体内分布结果一致,显示了放射性核素基因显像技术早期、特异性诊断肿瘤的可行性,为肿瘤核素基因显像技术进一步临床性研究提供实验室依据。