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乳酸菌具有广谱、高效、稳定、安全的特点,可以通过产生有机酸、过氧化氢和细菌素等抑菌物质抑制病原菌的生长,加强宿主机体肠道微生物的屏障作用,间接提高宿主非特异性免疫力,从而提高动物的健康水平和抗病力。许氏平鲉(Sebastes schlegelii)是我国黄渤海区域习见的鱼类之一,因其肉质鲜美、营养丰富、抗逆性强、生长迅速,已成为北方沿海网箱养殖和人工放流的重要经济鱼类。本研究首次从野生许氏平鲉肠道内分离获得了一株乳酸菌,采用16S rDNA基因序列分析法对其进行了分类鉴定,并对其生长特性、抑菌特性、动物安全性及其应用进行了研究,初步分析了该乳酸菌对许氏平鲉生长和抗病力的影响,旨在筛选能够提高许氏平鲉抗病力、促进其生长的乳酸菌,为研发适用于许氏平鲉养殖业的微生态制剂奠定基础,从而为其进一步应用于海水养殖中提供理论依据。1.许氏平鲉肠道乳酸菌的分离和鉴定本研究自野生许氏平鲉肠道内共分离出35株细菌,从中筛选出1株乳酸菌YH1,其菌落呈白色、圆形、表面光滑、边缘圆润,革兰氏染色呈阳性,且可发酵脱脂乳产生凝固、无气泡、呈酸性现象,基于生理生化特征和16s rDNA序列鉴定乳酸菌YH1为食窦魏斯氏菌。扫描电镜下乳酸菌YH1细胞形状规则,呈杆状,无鞭毛,表面较光滑,长度约为1.87μm。2.食窦魏斯氏菌YH1的特性研究本研究分析了酸碱度、温度和NaCl含量对食窦魏斯氏菌YH1生长的影响,结果表明YH1适宜的生长条件为pH5.7—8.8、温度20—40℃,最适生长条件为pH7.2—8.4,温度35℃,在MRS培养基中添加NaCl会抑制YH1的生长。选取多种病原指示菌以琼脂扩散法测定YH1培养12h产物的抑菌活性,结果显示YH1的无菌培养产物可显著抑制金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌、假交替单胞菌、哈维氏弧菌等病原指示菌的生长,表明YH1具有广谱抑菌性。将YH1代谢产物经酸处理、热处理和酶处理后,比较对鳗弧菌、假交替单胞菌和哈维氏弧菌的抑菌圈大小,初步探究了食窦魏斯氏菌YH1产物的抑菌作用机理,结果表明YH1代谢产物的抑菌性可能是由酸性物质、过氧化氢或细菌素类物质导致的。采用肌肉注射和腹腔注射两种方式对YH1的动物安全性进行检测,结果显示以108CFU/mL YH1注射许氏平鲉并未引发鱼体发病或死亡,表明YH1在108CFU/mL及以下浓度对许氏平鲉是相对安全的。3.食窦魏斯氏菌YH1用于许氏平鲉养殖的初步研究通过投喂含有105CFU/g食窦魏斯氏菌YH1的饲料56天,研究了YH1对许氏平鲉生长的影响,结果显示实验组许氏平鲉的增重率、特定生长率和饲料效率均高于对照组,表明乳酸菌YH1可促进许氏平鲉的生长。投喂试验结束后,使用鳗弧菌感染实验组和对照组许氏平鲉,观察各组许氏平鲉的存活状况,检测各组许氏平鲉肝脏清除病原菌的能力。实验结果显示:实验组的鱼体未引发死亡,对照组的鱼体12天后全部死亡;鳗弧菌侵染后7天,实验组的许氏平鲉单个肝脏上细菌的数量显著低于对照组的。这表明投喂乳酸菌YH1可以提高许氏平鲉遭受病原菌感染时的存活率和肝脏清除病原细菌的能力。综上所述,本研究从许氏平鲉肠道中分离鉴定得到一株食窦魏斯氏菌YH1,该菌具有广谱抑菌性和动物安全性,能够促进许氏平鲉的生长,提高鱼体抗病力,研究结果为乳酸菌制剂的研发和在海水养殖中的应用奠定了基础。