水蛭作为一味传统的药材有广泛的医药学应用，以往对水蛭的研究主要集中在其抗凝血活性、抗血栓等活性上，而很少见对水蛭抗氧化活性的研究。本论文采取硫酸铵分段盐析与CM Sepharose FF阳离子交换层析等方法对宽体金线蛭蛋白及短肽提取物进行初步分离纯化，并以清除羟基自由基、超氧阴离子自由基、ABTS自由基活性为指标，研究宽体金线蛭蛋白及短肽提取物的抗氧化活性。主要研究结果如下。1.比较宽体金线蛭鲜品与冻干品的抗氧化活性采用浓度为0.9%的生理盐水提取宽体金线蛭鲜品与冻干品粗蛋白，分别测定其清除羟基自由基、超氧阴离子自由基、ABTS自由基活性。结果显示，冻干品三种清除自由基活性均强于鲜品，并且冻干品与鲜品清除羟基自由基、ABTS自由基的活性均好于抗坏血酸阳性对照组，但其清除超氧阴离子自由基活性较抗坏血酸差。2.宽体金线蛭蛋白提取物抗氧化活性采用生理盐水提取宽体金线蛭蛋白，分别用硫酸铵分段盐析、CM Sepharose FF阳离子交换层析对水蛭粗蛋白进行初步分离纯化，并筛选活性较强的部分(硫酸铵分段盐选择0-30%、70%-100%部分，CM Sepharose FF阳离子交换层析选择3、4号峰)，测定各活性部分的三种清除自由基活性。结果显示，分段盐析后0-30%部分清除羟基自由基活性强于抗坏血酸，但清除超氧阴离子自由基、ABTS自由基活性不及抗坏血酸，70%-100%部分三种清除自由基活性均不及抗坏血酸。而经CM Sepharose FF分离后，3、4号峰清除三种自由基活性均明显高于抗坏血酸，表现出较强的抗氧化活性。3.宽体金线蛭酶解液抗氧化活性采用三水平四因素正交试验，用木瓜蛋白酶酶解宽体金线蛭，以肽含量为指标，确定最佳酶解工艺即加酶量7500U/g，酶解温度40℃，料液比1:4(W/V),酶解时间4h，最初pH8.5。CM Sepharose FF阳离子交换层析对宽体金线蛭短肽进行初步分离纯化，并测定其原液及分离纯化后活性较强部分(2、3号峰)的三种清除自由基活性。结果显示，酶解原液三种清除自由基活性均弱于抗坏血酸，但经CM Sepharose FF分离后，各组分清除羟基自由基、ABTS自由基活性均明显强于抗坏血酸，但其清除超氧阴离子自由基活性弱于抗坏血酸。经Sephadex G-25对CM Sepharose FF组分脱盐后，用Q-TOF测定活性强的组分的分子量分布主要集中在130.96Da~330.34Da范围内。4.宽体金线蛭蛋白及多肽提取物均有较好的抗氧化活性，并且经CM Sepharose FF分离纯化后期抗氧化活性均明显提高，较抗坏血酸对照组强；水蛭肽的活性较水蛭蛋白稍弱。在采用硫酸铵初步分离水蛭蛋白时，A(0-30%)显示出较好的清除羟基自由基及清除ABTS+自由基能力，A、C(70%-100%)的抗氧化能力都较B(30%-70%)强，与之前研究水蛭抗凝血活性时，往往选用B段进行研究有所不同；另外，与以往文献报道的采用Q-sepharoseFF、DEAE等阴离子交换层析分离水蛭抗凝血成分不同，本文采用CM sepharose FF阳离子交换层析分离纯化宽体金线蛭抗氧化活性成分，可以在以后宽体金线蛭的开发应用方面提供理论依据并且可以合理利用水蛭，避免造成资源的浪费。