利用微生物或杀虫微生物表达昆虫基因ds RNA,是利用RNAi技术进行害虫防治的一种有效途径。利用苏云金芽孢杆菌（Bt）介导RNA干扰可以对害虫进行毒蛋白与RNAi双效毒杀。本实验利用Bt HD73分别表达小菜蛾的精氨酸激酶基因（Px AK）、整合素β1亚基基因（Px Intβ1）和同时靶定这两个基因的的ds RNA,来抑制小菜蛾上Px AK和Px Intβ1基因的表达,并对比了融合基因与单基因的干扰效果,来明确Bt介导的RNAi技术同时靶标多个基因时对小菜蛾的防治效果。本实验从实验室保存的pHells-ds AK-β1质粒上分别扩增出Px AK和Px Intβ1的靶标片段,以及这两个片段的融合片段,选用结构优化过的pro3a7启动子,然后按照正向启动子、基因片段、反向启动子的顺序进行连接,将连接后的片段插入到高拷贝穿梭载体pHT315中,获得双启动子ds RNA表达载体,分别为Px AK的RNAi载体pHT315-ds AK、Px Intβ1的RNAi载体pHT315-ds Intβ1以及同时沉默Px AK和Px Intβ1的RNAi载体pHT315-ds AK-Intβ1。将pHT315-ds AK、pHT315-ds Intβ1、pHT315-ds AK-Intβ1三个RNAi表达载体和pHT315载体,去甲基化后分别电转到Bt的HD73菌株中,得到4种工程菌HD73-pHT315-ds AK、HD73-pHT315-ds Intβ1、HD73-pHT315-ds AK-Intβ1和HD73-pHT315。提取4种工程菌和HD73菌株的毒蛋白进行检测,发现工程菌正常表达了毒蛋白,且大部分毒蛋白晶体形态一致;提取4种工程菌和HD73菌株的ds RNA进行鉴定,发现HD73-pHT315-ds AK、HD73-pHT315-ds Intβ1和HD73-pHT315-ds AK-Intβ1菌株都表达了靶标基因的ds RNA,而作为对照的HD73-pHT315和HD73菌株则没有。用4种工程菌和HD73菌株的菌液分别浸泡处理饲料,然后喂食小菜蛾,统计死亡率,并计算5种菌株的LC₅₀,发现HD73-pHT315-ds AK-Intβ1菌株的LC₅₀最小,而HD73-pHT315的LC₅₀最大。用3 OD的菌液处理小菜蛾后,发现喂食24 h后,与对照组HD73相比,HD73-pHT315-ds AK-Intβ1菌株抑制了小菜蛾AK和Intβ1基因的表达;HD73-pHT315-ds AK和HD73-pHT315-ds Intβ1也都抑制了各自的靶标基因的表达;HD73-pHT315对靶标基因表达的抑制程度与对照组无明显差异。将HD73-pHT315-ds AK和HD73-pHT315-ds Intβ1两种菌液按照1:1的比例混配后处理小菜蛾,并和HD73-pHT315-ds AK-Intβ1处理组对小菜蛾的致死率进行比较,发现12 h以后,后者对小菜蛾的致死率明显高于前者。综上,含有同时靶定两个基因的RNAi载体HD73-pHT315-ds AK-Intβ1菌株,对Px AK和Px Intβ1靶标基因都有较好的干扰作用,杀虫能力相比于靶定单基因的工程菌更强,在田间防治害虫中有较好的应用前景。