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贵金属铂,钯纳米微粒具有各种独特的物理、化学性质,研究它们与生物分子相互作用的光谱特征及其分析应用具有重要的理论意义和应用前景。蛋白质是生物最重要的基本组成成分之一,其定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占有十分重要的地位。近年来,二级散射(Second Order Scattering,SOS)和共振光散射(Resonance Light Scattering,RLS)技术作为新兴的、简便的、高灵敏的分析技术受到人们的广泛关注。本文探讨了铂钯纳米微粒的制备,及其与蛋白质相互作用的SOS和RLS光谱特征、影响因素、分析化学性质及其分析应用。
制备铂纳米微粒是为了考察纳米铂与蛋白质的作用,考虑到保护剂的加入会阻碍纳米铂与蛋白质的作用,本文选用既有还原作用又有保护分散作用的柠檬酸三钠作为还原剂。油浴加热,柠檬酸三钠还原氯铂酸制备出平均粒径为1.3 nm,粒径分布窄的纳米铂金属微粒;微波加热制备出了平均粒径为1.4 nm的纳米钯金属微粒。纳米铂钯胶体均能稳定存在6个月以上。
在酸性介质中,铂纳米微粒与血清蛋白共存时,形成较大体积的聚集体,纳米铂由1.3 nm变为2.6 nm,且粒径分布变宽。在SOS法中,纳米铂体系的SOS峰位于244,258,300和323 nm,本实验选用λex/λem=258 nm/516 nm为测量波长,考察了适宜的反应条件,光谱特征以及以铂纳米微粒作为SOS探针测定蛋白质时方法的灵敏度和选择性。发现:蛋白质在一定的浓度范围内与SOS强度成正比,方法的灵敏度高,其检出限(S/N=3)分别为3.8 ng/mL(牛血清白蛋白BSA)、7.9 ng/mL(人血清白蛋白HAS),并且具有较好的选择性,除了Ag+,Pb2+,Cu2+的允许量低外,其它常见的金属离子、非金属离子和氨基酸的影响较小。同时还研究了纳米铂用于RLS法测定蛋白质的分析应用,发现:蛋白质在一定的浓度范围内与RLS强度也成正比,方法的灵敏度高,其检出限(S/N=3)分别为4.2 ng/mL(牛血清白蛋白BSA)、10.7 ng/mL(人血清白蛋白HAS),并且具有较好的选择性。将以上两种方法用于实际样品的测定,结果令人满意。
对纳米钯微粒与蛋白质相互作用的二级散射(SOS)光谱进行了研究,在酸性BR缓冲溶液中,平均粒径为1.4 nm钯纳米微粒与生物大分子血清蛋白共存时,形成较大体积的聚集体,纳米钯增大为2.4 nm,且粒径分布变宽,体系的散射强度急剧增强。考察了SOS光谱特征、适宜的反应条件以及铂纳米微粒作为SOS探针测定蛋白质时方法的灵敏度和选择性,发现,蛋白质在一定的浓度范围内与SOS强度成正比,方法的灵敏度高,其检出限(S/N=3)分别为2.3 ng/mL(牛血清白蛋白BSA)、11.2 ng/mL(人血清白蛋白HAS),并且具有较好的选择性,除了Ag+,Pb2+,Cu2+的允许量低外,其它常见的金属离子、非金属离子和氨基酸的影响较小。据此提出了用二级散射(SOS)法测定蛋白质的方法。将其用于实际样品的测定,结果令人满意。