【摘 要】
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目的:研究胰损伤后胰岛β细胞再生过程中,Pdx-1/Ngn3基因转录信号中的Pdx-1、Ngn3、Nkx2.2基因在胰组织中的表达及分布,探讨Pdx-1/Ngn3基因转录信号在胰干细胞向β细胞分化及胰岛再生中的作用及机制,为干细胞治疗糖尿病的临床应用及胰岛β细胞再生的分子调控机制提供实验依据。方法:35只健康SD成年大鼠、雌雄均有,体重300±10g,随机分为正常对照组(Normal groups
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目的:研究胰损伤后胰岛β细胞再生过程中,Pdx-1/Ngn3基因转录信号中的Pdx-1、Ngn3、Nkx2.2基因在胰组织中的表达及分布,探讨Pdx-1/Ngn3基因转录信号在胰干细胞向β细胞分化及胰岛再生中的作用及机制,为干细胞治疗糖尿病的临床应用及胰岛β细胞再生的分子调控机制提供实验依据。方法:35只健康SD成年大鼠、雌雄均有,体重300±10g,随机分为正常对照组（Normal groups）5只、假手术组（Sham groups）5只、PDL模型组（PDL model groups）25只。PDL模型组再分为5个亚组,即PDL1 d组、PDL3 d组、PDL5 d组、PDL7 d组、PDL9 d组,每组5只。假手术组大鼠麻醉后打开腹腔暴露和翻动胰,但不结扎胰管;模型组大鼠打开腹腔暴露胰后,于前大胰管近十二指肠处结扎胰管,构建PDL模型。各组分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、9 d取胰管结扎远侧端胰体尾部组织,H-E染色观察,免疫组织化学染色及Western Blot技术检测Pdx-1/Ngn3基因转录信号中Pdx-1、Ngn3、Nkx2.2基因的表达分布及表达水平。结果:（1）H-E染色:正常对照组和假手术组胰腺组织结构清晰,胰腺小叶界限清楚,小叶间间隙内未见细胞存在,组成各小叶的细胞结构完整,胰岛、腺泡及导管结构清晰。PDL术后1 d,胰腺组织充血水肿,但小叶结构完整;PDL术后3 d,胰腺组织腺泡肿胀,腺泡间可见炎性细胞浸润,胰腺小叶间隙增宽,小叶内结构排列不规则,并开始出现少量新生的管状复合体结构（tubular complex,TC）;PDL术后5 d,胰腺小叶内腺泡肿胀、排列紊乱,细胞间隙增宽,小叶结构模糊,并出现大量的新生管状复合体结构,小叶之间的间隙明显增宽,界限不清,位于小叶间隙的间质内,出现大量增殖的细胞;PDL术后7d-9d,新生的管状复合体结构替代被破坏的胰腺小叶,胰腺小叶结构重建,胰腺小叶间细胞数量减少,间隙边界清晰。（2）免疫组织化学染色:（1）Pdx-1:正常对照组与假手术组都存在Pdx-1基因的少量表达,两组之间表达无明显差异性,阳性细胞主要分布在胰岛、腺泡和小叶被膜下。模型组与正常对照组和假手术组相比,Pdx-1在PDL 1 d时,表达即开始升高,PDL 5 d时,表达达到高峰,PDL 7 d后,表达开始降低,模型组与正常对照组和假手术组相比,Pdx-1基因表达存在差异性（P<0.001）。（2）Ngn3:正常对照组与假手术组,Ngn3基因都有少量表达,两组之间表达无明显差异性,阳性细胞主要分布在胰岛和导管上皮。模型组与正常对照组和假手术组相比,Ngn3在PDL 1 d时表达无明显变化,PDL 3 d时表达开始升高,PDL 5d时表达达到高峰,PDL 7 d后表达下降,模型组与正常对照组和假手术组相比,Ngn3基因表达存在差异性（P<0.001）。（3）Nkx2.2:无论是正常对照组还是假手术组,Nkx2.2基因都有少量表达,但二者无差异性,阳性细胞主要分布在胰岛和腺泡。模型组与正常对照组和假手术组相比,Nkx2.2在PDL 1 d时,表达稍增高,PDL 5 d时表达达高峰,PDL 7 d后表达下降,模型组与正常对照组和假手术组相比,Nkx2.2基因表达存在差异性（P<0.001）。（3）免疫组织化学荧光双重染色:与正常对照组和假手术组相比,PDL 3 d模型组胰腺小叶间和腺泡间的间质内,出现散在的细胞群,PDL 5 d时细胞数量达到高峰,部分细胞呈Ngn3+/Insulin+、Ngn3+/Pdx-1+、Ngn3+/Nkx2.2+、Nestin+/Pdx-1+双重免疫阳性反应。（4）Western blot检测:与正常对照组和假手术组比较,模型组中Pdx-1、Ngn3、Nkx2.2蛋白表达水平均从PDL 1 d时增高,PDL 5 d时达到高峰,PDL 7 d后降低,模型组与正常对照组和假手术组相比,Pdx-1、Ngn3、Nkx2.2蛋白表达水平存在差异性（P<0.001）。结论:Pdx-1/Ngn3转录基因信号在胰管结扎后胰损伤中表达上调,Pdx-1/Ngn3转录基因信号在β细胞分化及胰岛再生中具有重要的调控作用,胰损伤后间质内出现的细胞群可能为胰干细胞,部分能向胰岛β细胞分化,其在胰岛再生的研究中具有重要意义。
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