离体脑损伤实验模型建立与静脉麻醉药物作用的比较

来源 :上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gsice0
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目的:利用大鼠皮层、海马脑片和神经细胞培养建立脑损伤离体实验模型,同时建立方便有效的定量评价方法,考察氯胺酮对不同性质脑损伤的作用效果,通过皮层脑片缺氧缺糖损伤模型,比较氯胺酮、咪唑安定、硫喷妥钠、异丙酚的脑保护作用.方法:制备大鼠皮层和海马脑片,原代培养胎鼠皮层神经细胞,电生理学方法检测脑片活性,建立缺氧缺糖(OGD),谷氨酸,过氧化氢(H<,2>O<,2>)三类损伤模型,采用新鲜脑片与氯化三苯四哇氮(TTC)溶液共同孵育、有机溶剂抽提比色法,培养神经细胞四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法),测量吸光度(A值),定量考察损伤程度和氯胺酮作用效果,脑片孵育上情液乳酸脱氢酶(LDH)测定,脑片TTC染色照相计算机图像灰度分析、病理切片HE染色方法考察脑片损伤程度.对于大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤模型,通过脑片TTC染色、溶剂抽提定量比色方法,比较不同浓度氯胺酮,咪唑安定,硫喷妥钠、异丙酚的作用效果.结论通过脑片孵育和神经细胞培养可以方便有效的建立脑损伤离体实验模型.该实验制备的脑片具有良好的细胞活性.新鲜脑片与TTC溶液共同孵育、溶剂抽提比色的方法可以方便有效地定量评价脑片损伤程度和药物保护作用.氯胺酮对脑片和神经细胞的缺氧缺糖与谷氨酸损伤都有保护作用,而对过氧化氢损伤无保护作用.对于大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤模型,四种静脉麻醉药物脑保护作用由强到弱依次为:氯胺酮>硫喷妥钠>咪唑安定>异丙酚.咪唑安定和硫喷妥钠在超过临床使用范围的大剂量时有部分保护作用;临床剂量的异丙酚没有保护作用,相反,大剂量时会加重大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤.
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