论文部分内容阅读
层层自组装(Layer-by-layer, LbL)微胶囊(Microcaspules, MC)具有结构可调、易于修饰、能控制药物释放等优点,在药物载体领域有着广泛的应用价值。基于化学合成材料制备的LbL-MC通常生物相容性较差,而基于蛋白、核酸等天然高分子材料的LbL-MC则稳定性较差,限制了其实际应用。因而需要寻求新的天然高分子材料,以制备同时具有较好的生物相容性和稳定性的LbL-MC。肝素是自然界中负电性最强的多糖,壳聚糖则是自然界中唯一的正电性多糖,通过静电作用,二者可形成稳定的复合物;两种多糖都具有优良的生物相容性,已经广泛应用于生物材料领域。基于以上考虑,本文设计并构建了一种基于肝素和壳聚糖的LbL-MC(HEP/CHI)5,并对其形貌、尺寸、表面电荷性质、稳定性、生物相容性、载药能力以及药物释放行为进行了研究。结果表明(HEP/CHI)5具备良好的稳定性和生物相容性,能有效装载药物,并表现出一定的药物控制释放性质。具体内容如下:(1)(HEP/CHI)5的制备与性能表征制备了(HEP/CHI)5,并对其制备过程进行了优化。在制备过程中肝素(Heparin,HEP)和壳聚糖(Chitosan,CHI)的最佳浓度为2g/L。随着膜层数的增加,其表面ζ-电势数值正负交替变化,表明HEP和CHI已被成功吸附,且pH的变化对HEP和CHI的吸附效果无影响。该微胶囊最佳膜层数为HEP和CHI各5层,此时微胶囊机械强度较高且不易团聚。该微胶囊壳层为多孔膜状结构,液态下呈球形。其在干燥状态下粒径约为4.2μm,在水溶液中粒径约为5.2μm。在该微胶囊中,HEP含量为(37.5±0.3) wt%,pH5.0、7.4和10.0条件下24h后释放率均低于30%,说明这种微胶囊在酸碱中性条件下都具有较好的稳定性。MTT实验表明该(HEP/CHI)5对ECs、HeLa和A549细胞几乎没有毒性,具有良好的生物相容性。综上,(HEP/CHI)5适宜用作药物载体。(2)(HEP/CHI)5-DOX微胶囊的抗肿瘤研究将阿霉素(Doxorubicin,DOX)装载到上述的(HEP/CHI)5微胶囊中,并对(HEP/CHI)5-DOX微胶囊的抗肿瘤性能进行了考察。激光共聚焦(Confocal laser scanningmicroscope, CLSM)图像和载药量测试结果表明HEP和DOX在该微胶囊同时存在,HEP主要存在于胶囊壁上,含量为(48.0±0.5) wt%;DOX则在胶囊壁和内腔中同时存在,载药量为(7.3±0.3) wt%。DOX的释放实验结果显示在pH5.0下,DOX释放较快,24h后达到92.1%;在中性和碱性条件下释放较慢,说明较低的pH对DOX的释放具有明显的促进作用。荧光图像结果显示5h后微胶囊依然保持完整,表明该微胶囊可以保护HEP不被肝素酶降解。CLSM图像结果还显示这种微胶囊可以促进DOX和HEP共同向细胞内传递。MTT实验结果表明DOX和HEP在抑制肿瘤方面表现出了一定的协同效应,并且A549细胞具有更为明显的协同作用效果。