论文部分内容阅读
背景：子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)在育龄期妇女中的发病率约为10%,近年来研究发现,EMs中存在凋亡相关基因的异常表达。本课题以化瘀解毒中药灌胃于病证结合EMs大鼠,选择细胞凋亡的关键蛋白酶：半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3以及在细胞线粒体调亡通路中的重要调节因子：B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bax蛋白(Bax)及缺氧诱导因子(HIF-1α)探讨化瘀解毒中药对内异症的治疗意义及作用靶点。目的：以Caspase-3、Bcl-2/Bax及HIF-1α为观察指标,探讨化瘀解毒法对内异症的作用靶点,为扩大临床应用提供依据,为新方新药的研发提供理论支持。方法：本课题以手术复制EMs模型后结合人工干预刺激建立瘀毒证模型。造模成功后随机分为阳性对照组、缺氧内异方高剂量组、缺氧内异方低剂量组、常氧内异方高剂量组及常氧内异方低剂量组,另设模型组、空白对照组、假手术组共8组大鼠。对各组大鼠连续灌胃4周后,取异位组织用4%甲醛固定,Western Blot法检测Caspase-3、Bcl-2/Bax及HIF-1α在异位内膜组织中的半定量表达情况,并光镜下观察异位组织形态学的变化。结果：①实验过程中实验动物一般状态的变化：模型组大鼠易激惹、烦躁,不易抓取,同笼中大鼠互相撕咬、打斗。以上变化随灌胃给药天数的增加而加剧,久之大鼠渐消瘦、毛发稀疏。空白对照组大鼠体重逐渐增长、精神体征、活动反应如常；缺氧内异方高、低两组大鼠亦表现出烦躁、易激惹,但程度较模型组轻,随着灌胃给药天数的增加稍有缓解；常氧内异方高剂量组随着灌胃给药天数的增加,上述表现越来越轻。阳性对照组大鼠外在表现随着灌胃给药天数增加无明显变化。②Caspase-3、Bcl-2/Bax及HIF-1α在异位内膜组织中的半定量表达情况：常氧内异方高剂量组大鼠异位内膜中Caspase-3水平明显高于模型组,差别有统计学意义(P<0.01),与阳性对照组比较,差别无统计学意义(P>0.05)；常氧内异方高剂量组异位内膜中Bcl-2/Bax水平明显低于模型组,差别有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组相比,差别无统计学意义(P>0.05),缺氧内异方高剂量、低剂量组相比,差别有统计学意义(P<0.05)；常氧内异方高剂量组异位内膜中HIF-1α水平明显低于模型组,差别有统计学意义(P<0.01),并低于阳性对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。③大体标本：常氧内异方高剂量组的异位病灶较小,比模型组明显缩小,与阳性对照组无明显差异,而且盆腔黏连较轻；④病理形态学方面：光镜下模型组异位内膜结构完整,上皮为单层柱状或立方状,大部分上皮细胞有分泌现象,可见薄层间质和丰富的血管,有的见少量腺体及炎细胞浸润。常氧内异方高剂量组异位内膜上皮呈低柱状、扁平状,疏松排列,部分病灶内膜萎缩呈线状,个别病灶内膜脱落、消失。大部分病灶间质细胞明显减少、缺如,炎性细胞浸润减少,周围血管减少。阳性对照组异位内膜腺上皮层明显变薄,细胞呈柱状或低柱状甚至扁平状松散排列,细胞核不规则,位置不定。结论：①化瘀解毒中药能够缩小异位病灶,改善盆腔黏连；②化瘀解毒中药能减少异位病灶的血供、减少腺体形成、降低炎细胞浸润等来缩小异位病灶；③化瘀解毒中药可能通过调节Bcl-2/Bax.降低HIF-1α、增强Caspase-3高表达,促进异位细胞凋亡来阻断异位内膜的增殖,缩小异位病灶。