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目的:通过对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关胃病患者胃黏膜MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性的检测,以健康正常人为对照组,研究肝胃不和证、脾胃湿热证、脾气虚证与胃黏膜MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性的相关性,探讨Hp相关胃病不同中医证候的易感基因型,从基因多态性角度为临床中西医结合辨证治疗Hp相关胃病提供一定的理论依据。方法:1.病例来源本临床实验研究病例的胃黏膜组织标本,是由本课题组成员2011年5月至2013年10月收集于在广州中医药大学一附属院脾胃病科门诊及住院部就诊的患者。包括符合纳入标准的Hp相关胃病患者99例(慢性胃炎患者72例,消化性溃疡患者27例)其中肝胃不和证30例,Hp阳性者27例;脾胃湿热证37例,Hp阳性者33例;脾气虚证32例,Hp阳性者26例;并在广州中医药大学招募健康受试者13例,其中Hp阳性者2例。所有受试对象均由课题组成员询问一般资料,临床症状资料,进行症状分级,填写并完成临床观察表。2.胃黏膜标本采集各组受试对象均行电子胃镜检查,用活检钳在胃窦距幽门2-3cm胃大弯和小弯处共钳取胃黏膜组织4块,每块约0.3-0.4cmX0.3-0.4cm大小,其中1块立即行快速尿素酶Hp感染试验检测。1块放入4%多聚甲醛中固定,后立即送病理科,进行石蜡包埋,备胃黏膜Hp感染美蓝染色组织学及HE病理组织学检测。另两块分别放入两支冻存管,后冰壶移放入-80℃低温冰箱中保存,待标本收齐后进行基因多态性检测。3.病理指标检测和观察HE病理和美蓝染色组织学检测后,在光学显微镜下观察各胃黏膜组织病理标本的Hp感染情况、感染程度、胃黏膜炎症程度和活动度以及萎缩伴肠化生和或异型增生的不同病理演变阶段情况。4.胃黏膜基因多态性检测采用PCR方法对每例受试者胃黏膜组织DNA进行扩增并电泳进行其扩增质量鉴定后,以sanger双脱氧链终止直接测序法进行各标本MUC1-568和HSP70-2-1267基因多态性检测。结果:1.一般资料情况各组一般资料包括年龄、性别、病种、病程之间,经统计学检验,差异无统计学意义(P>0.05),各组一般资料具有可比性。2.病种分布情况消化性溃疡男性发病率高于女性,差异有统计学意义(P<0.05),消化性溃疡中脾胃湿热证明显多于脾气虚证,差异有统计学意义(P<0.05)。3.Hp感染及其感染程度比较Hp感染率健康受试者明显低于Hp相关胃病患者(慢性胃炎、消化性溃疡),差异有统计学意义(P<0.05);Hp感染率呈现慢性胃炎>消化性溃疡的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。Hp感染程度健康受试者明显轻于Hp相关胃病患者(慢性胃炎、消化性溃疡),差异有统计学意义(P<0.05);慢性胃炎和消化性溃疡Hp感染程度无明显差异。三种中医证型组之间Hp检出率比较,呈现出肝胃不和证>脾胃湿热证>脾气虚证的趋势,差异无统计学意义(P>0.05),Hp感染程度呈现出脾胃湿热证、肝胃不和证>脾气虚证的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。4.临床症状比较慢性胃炎组口苦的症状明显重于消化性溃疡组,差异有统计学意义(P<0.05);脾气虚证食欲减退及恶心的症状明显重于肝胃不和证和脾胃湿热证;肝胃不和证反酸的症状明显重于脾胃湿热证和脾气虚证;脾胃湿热证口苦的症状明显重于肝胃不和证和脾气虚证,差异有统计学意义(P<0.05)。5.胃黏膜炎症程度、活动度、病理演变阶段情况胃黏膜炎症程度、炎症活动度、萎缩程度、肠化生、异型增生均呈现出消化性溃疡组>慢性胃炎组的趋势,差异无统计学意义(P>0.05);三种中医证型间胃黏膜炎症程度、炎症活动度、萎缩程度、肠化生、异型增生均呈现出脾胃湿热证最重的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。6.MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性与Hp相关胃病的关系MUC1-568基因型在Hp相关胃病和健康受试者各组间的差异无统计学意义(P>0.05)。HSP70-2-1267 GG基因型在Hp相关胃病和健康受试者中呈现出消化性溃疡>健康受试者>慢性胃炎的趋势,其余基因型差异无统计学意义(P>0.05)。7.MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性与Hp感染的关系MUC1-568基因AG基因型呈现Hp阳性>Hp阴性的趋势,其余基因型在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。MUC1-568基因型在Hp感染程度各组中无明显差异(P>0.05)。HSP70-2-1267基因型在Hp阳性组和Hp阴性组中以及在Hp感染程度各组中无明显差异(P>0.05)。8.MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性与胃黏膜炎症程度、活动度、病理演变阶段的关系MUC1-568基因型在胃黏膜炎症程度、活动度、病理演变阶段各组间无明显差异(P>0.05)。HSP70-2-1267GA基因型与胃黏膜肠化生、异型增生有关联。9.MUC1-568、HSP70-2-1267基因多态性与三种中医证型的关系MUC1-568 AG基因型在肝胃不和证、脾胃湿热证、脾气虚证以及健康受试者组中呈现脾气虚证>肝胃不和证>脾胃湿热证>健康受试者的趋势,其余基因型在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。HSP70-2-1267 AA基因型呈现出脾胃湿热证>肝胃不和证>健康受试者>脾气虚证的趋势,其余基因型差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本临床实验研究采用快速尿素酶实验、美蓝染色、HE病理染色、PCR的DNA扩增后电泳质量鉴定以及sanger双脱氧链终止直接测序法探讨胃黏膜MUC1-568和HSP70-2-1267基因多态性与Hp相关胃病的关联,初步得出以下结论:1.消化性溃疡男性发病率高于女性,且消化性溃疡脾胃湿热证明显多于脾气虚证。Hp相关胃病患者Hp感染率及感染程度有实证(脾胃湿热证、肝胃不和证)高于或重于虚证(脾气虚证)的趋势。胃黏膜炎症、活动度、萎缩、肠化生及异型增生程度均有消化性溃疡重于慢性胃炎、脾胃湿热证重于其余两种中医证型的趋势。2.HSP70-2-1267 GA基因型与Hp相关胃病胃黏膜肠化生、异型增生有关联。HSP70-2-1267GG基因型可能与胃溃疡的发生有关联。MUC1-568AG基因型可能与Hp相关胃病脾气虚证相关联,HSP70-2-1267AA基因型可能与Hp相关胃病脾胃湿热证相关联。