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目的：肿瘤的发生发展与许多因素有关,其中促血管生成等因子的改变是肿瘤发展的重要因素。目前研究表明环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)能通过多种机制促进肿瘤新生血管生成。过去与COX-2相关研究主要集中在结肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌等病变组织,而对COX-2与外阴组织病变的关系研究甚少。外阴上皮内非瘤样变(nonneoplastic epithelial disorders of vulva, NNEDV)和外阴上皮内瘤变(Vulvar intraepithelial neoplasia, VIN)是两种公认的外阴癌前病变。NNEDV很难治愈,发展为外阴癌的危险性为9%,其治疗的方法较多,传统的治疗方法疗效不确切,患者依从性差。聚焦超声(focused ultrasound)治疗是一种新型的物理治疗技术,它以无创、安全、见效快等优点日益受到关注。本研究拟观察COX-2和CD34在外阴上皮内非瘤样变、外阴上皮内瘤变和外阴鳞癌中的表达,探讨其在外阴癌前病变和外阴鳞癌发生、发展中的意义。另外本课题采用聚焦超声治疗NNEDV,评价聚焦超声方法对NNEDV治疗的有效性,同时结合超声治疗前后外阴皮肤组织中COX-2和CD34表达水平变化,探讨超声治疗外阴上皮内非瘤样变的可能机制。方法：1、回顾性分析泸州医学院附属医院病理科2003年1月-2006年7月经病理确诊为“外阴上皮内非瘤变、外阴上皮内瘤变、外阴鳞状细胞癌”的存档蜡块,共147例。外阴上皮内非瘤变组107例(鳞状上皮细胞增生型52例、硬化性苔藓37例,鳞状上皮细胞增生合并硬化苔藓型18例)；外阴上皮内瘤样变组42例(VINⅠ17例、VINⅡ14例、VINⅢ11例)；外阴鳞状细胞癌组共34例,外阴正常皮肤10例。调阅病历并收集34例外阴鳞状细胞癌患者的临床病理资料进行统计学分析,包括：年龄,FIGO分期,有无淋巴结转移。采用免疫组织化学方法,利用体视学方法每张切片随机等距离抽取10个高倍视野,计算出阳性细胞占所有组织面积的百分率,同时,结合Image-Pro图像分析软件得到阳性面积内光密度积分。利用摆线测格进行血管内表面积计数,根据体视学原理对单位体积内血管内表面积(Sv)进行无偏估计,检测COX-2和CD34在不同外阴病变组织中表达。数据分析采用SPSS16.0完成。2、收集NNEDV组：皮损标本来源于2006年8月-2008年1月泸州医学院附属医院妇产科门诊就诊并行聚焦超声治疗的外阴上皮内非瘤样变患者的治疗前后标本。共29例患者行聚焦超声治疗(鳞状上皮增生型19例,硬化性苔癣10例)。聚焦超声治疗组中有29例患者于治疗后6个月完成随访并进行疗效判定。其中18例患者(SH11例,LS7例)于聚焦超声治疗后5-12个月(平均8个月)在原活检部位再次取材,而另外11位患者因症状明显改善而拒绝再次活检取材。采用石蜡包埋、苏木素-伊红染色和免疫组织化学方法,利用体视学方法每张切片随机等距离抽取10个高倍视野,计算出阳性细胞占所有组织面积的百分率,同时,结合Image-Pro图像分析软件得到阳性面积内光密度积分。利用摆线测格进行血管内表面积计数,根据体视学原理对单位体积内血管内表面积(Sv)进行无偏估计,检测聚焦超声治疗前后NNEDV病变组织中COX-2和CD34表达水平变化。数据分析采用SPSS 16.0完成。结果：1、COX-2在不同外阴疾病中的表达情况：在外阴上皮内非瘤变组中,硬化性苔藓组的COX-2表达强于鳞状上皮细胞增生组、混合型组,且有显著差异；SH组和混合型组COX-2表达强度之间无明显差异。在外阴上皮内瘤变组,VINⅢ组COX-2表达均高于VINⅡ和VINⅠ且有显著性差异。VINⅡ组和VINⅠ组之间无明显差异。在外阴鳞状上皮癌(角化型)中COX-2的平均阳性面积率和光密度值的表达均高于外阴上皮内瘤变组、上皮内非瘤变组,有显著性差异；COX-2与外阴癌临床病理特征关系：根据FIGO分期,在Ⅲ期外阴鳞状细胞癌中COX-2表达均高于Ⅰ期和Ⅱ期,有显著性差异(P<0.05)。有淋巴结转移的VSCC的COX-2的表达高于无淋巴结转移组,两者比较有显著性差异。统计学分析表明,COX-2表达与患者年龄无关,与FIGO分期有关。根据FIGO分期,分期越高的肿瘤阳性表达越强,即Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ。2、CD34在不同外阴疾病中的表达情况：在外阴上皮内非瘤变组中,外阴硬化性苔藓组织中血管内表面积密度明显低于鳞状上皮细胞增生组织和混合型组织,有显著性差异；鳞状上皮细胞增生组和混合型组之间无明显差异。外阴上皮内瘤变组的血管内表面积密度高于外阴上皮内非瘤变组且有显著性差异(P<0.05)；在外阴上皮内瘤变中,VINⅢ的血管内表面积密度高于VINⅡ和VINⅠ,有显著性差异;VINⅡ和VINⅠ两组之间无明显差异(P=0.289)。在外阴鳞状细胞癌中血管内表面积密度高于VIN组和NNEDV,有显著性差异。CD34与外阴鳞状细胞癌临床病理特征关系：根据FIGO分期,在Ⅲ期外阴鳞状细胞癌中血管内表面积密度值均高于Ⅰ期和Ⅱ期,有显著性差异。Ⅱ期外阴鳞状细胞癌的血管内表面积密度高于Ⅰ期,有显著性差异。有淋巴结转移的VSCC的平血管内表面积密度值高于无淋巴结转移组,两者比较有显著性差异。统计学分析表明,CD34的表达与患者的年龄无关,与FIGO分期有关。根据FIGO分期,分期越高的外阴鳞状细胞癌的血管内表面积密度值越高,即Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期。3、在VIN组织中COX-2与CD34的表达呈正相关。在外阴鳞状细胞癌中COX-2和CD34的表达呈正相关。4、聚焦超声治疗后6个月,29例NNEDV患者中临床治愈10例(占34.5%),有效16例(占55.2%),总有效率为89.7%。外阴上皮内非瘤变组的COX-2在治疗后低于治疗前,有显著性差别(P<0.05),略高于正常组。外阴上皮内非瘤变组的CD34在治疗后组织中血管内表面积密度高于治疗前,有显著性差别,略低于正常组。结论：本研究首次创新性地研究COX-2在外阴上皮内非瘤变、外阴上皮内瘤变和外阴鳞状细胞癌的动态变化,并首次动态观察了外阴上皮内非瘤样变组织在经聚焦超声治疗前后COX-2的表达变化。1、在外阴上皮内非瘤样变组中的血管存在异常,主要表现为微血管数目减少,其中外阴硬化性苔藓组患者血管减少最显著,提示血管异常是外阴上皮内非瘤样病变的主要变化之一。2、COX-2在外阴鳞状细胞癌的发生、发展中发挥着重要作用。临床应警惕NNEDV、VIN存在恶变的可能性,NNEDV、VIN的患者需要长期随访,检测COX-2在两种病变中的表达情况,可作为随访病变进展的指标；3、CD34和COX-2的表达与外阴鳞状细胞癌的发生有关,与外阴鳞癌的恶性进展关系密切,FIGO分期越高,’有淋巴结转移的外阴鳞状细胞癌的COX-2和CD34表达增高。在外阴鳞状细胞癌中COX-2和CD34的表达有相关性；4、聚焦超声疗效可靠,不仅可以治愈或减轻顽固性的外阴瘙痒,使外阴皮肤组织结构恢复正常,同时促进真皮内微血管形成,COX-2表达明显下降。