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目的:通过检测HIF—1α和COX—2在非小细胞肺癌(NSCLC)及正常肺组织中的表达,初步探讨它们在非小细胞肺癌(NSCLC)的发生、侵袭和转移中的作用。
方法:用免疫组织化学SP法检测30例手术切除的非小细胞肺癌(NSCLC)组织(鳞癌15癌,腺癌15例)和30例正常肺组织中HIF—1α和COX—2的表达水平。NSCLC组织均为手术切除获得,术前患者未作任何放疗或化疗。30例正常肺组织作对照。将组织标本经10%福尔马林固定,石蜡包埋,常规4μm连续切片。将石蜡切片常规脱蜡至水后,蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)浸泡5min。高压热修复抗原,用3%过氧化氢甲醇液9呼育10min以消除内源性过氧化酶活性。用正常山羊血清封闭交叉反应引起的非特异性着色。滴加一抗(HIF—1α兔抗人多克隆抗体的稀释度1:200;COX—2兔抗人多克隆抗体稀释度1:50)孵育,PBS冲洗后,用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。滴加生物素标记二抗孵育,PBS冲洗后滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液(S—A/HRP)孵育,PBS冲洗后,DAB显色,Mayer苏木精溶液轻度复染,酸化,蓝化,梯度脱水,透明,封片,显微镜观察。注意控制背景。以细胞浆或者细胞核内出现棕黄色颗粒或者棕黄色团块为阳性细胞。HIF—α的阳性信号主要位于细胞核中,部分位于细胞浆中,细胞间质中也可见表达:而COX—2的阳性表达信号主要位于细胞浆中。按每张切片阳性细胞比例数、着色深浅划分为—、+、++、+++共四个等级。基本不着色或者着色细胞少于5%为(—),着色浅淡或者着色细胞占整张切片5%~25%为弱阳性(+),着色适中或者着色细胞占整张切片26%~50%中度阳性(++),着色深或者着色细胞占整张切片超过50%强阳性(+++)。
结果:HIF—1α和COX—2在NSCLC中的表达明显高于正常肺组织(P<0.01),但它们的表达与患者的年龄、组织分化程度、TNM分期、病理类型、吸烟、性别及有无咳血等临床病理因素无关(P>0.05)。在NSCLC中,HIF—1α和COX—2的表达呈正相关,有明显统计学意义(r=0.411,P<0.05)。
结论:(1)在NSCLC中存在HIF—α和COX—2的过度表达,均明显高于正常肺组织,说明两者可能均参与了非小细胞肺癌的致癌过程。(2)HIF—1α蛋白、COX—2蛋白在非小细胞肺癌组织的表达与患者的年龄、组织分化程度、TNM分期、病理类型、吸烟、性别及有无咳血等临床病理因素无关,提示他们与非小细胞肺癌的进展、侵袭和转移可能无关,或者关系不大。(3)HIF—1α蛋白、COX—2蛋白在非小细胞肺癌组织的表达成正相关,有统计学意义(r=0.411,P<0.05),提示HIF—1α、COX—2蛋白的表达,可能共同促进细胞的恶性转化,从而促进非小细胞肺癌的形成。