目的:研究手霉素(Manumycin)联合顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞3AO的体外抑制作用及对裸鼠移植瘤的抑制作用,分析手霉素联合顺铂抑制3AO细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制,探讨手霉素联合顺铂应用于卵巢癌的可行性。方法:1以不同浓度的手霉素作用于体外培养的人卵巢癌3AO细胞,用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色试验检测细胞的增殖活性,并观察细胞的形态学变化。2采用MTT比色法检测手霉素联合顺铂对3AO细胞增殖抑制的影响,采用金氏公式[1]分析相互作用指数(Iteraction Index),评价联合后的作用,如q>0.85表示相加作用,q<0.85为拮抗作用。3建立3AO细胞裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至接种后第2周,随机分为4组,每组5只:分别为对照组、手霉素组、顺铂组、联合用药组。实验过程中观察裸鼠的饮食、活动、反应等情况。记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。4免疫组织化学法检测移植瘤组织Survivin、NF-κB、VEGF、Caspase-3蛋白的表达。5流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测移植瘤组织细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果:1 MTT比色法显示手霉素(5、10、20、40、60μmol/L)对3AO细胞增殖具有抑制作用。不同浓度手霉素处理细胞24~72h后,与对照组相比,各处理组OD值均有不同程度下降,差异有统计学意义(p<0.05)。而且随手霉素浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,即手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用呈明显的时间-剂量依赖效应。光镜下观察细胞形态:未经药物作用的细胞呈梭形,形态饱满,而用药组细胞皱缩,破裂,呈不规则形,脱落细胞增多,抑制了3AO细胞的生长。2 MTT比色法分析手霉素联合顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,结果显示:10、20、40μmol/L的手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,而且随手霉素浓度的增大,其与顺铂的联合作用增强。金氏公式分析相互作用指数表明不同浓度的顺铂联合10、20、40μmol/L的手霉素的q值均>0.85。3成功建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,接种成功率为100%。治疗结束后裸鼠移植瘤体积,各处理组小于对照组,联合用药组小于单药组,差异均有统计学意义(p<0.05)。对照组、手霉素组、顺铂组、联合用药组,抑瘤率分别为0.00%、29.85%、37.36%、64.60%。4免疫组织化学法检测3AO细胞裸鼠移植瘤组织Survivin、VEGF、NF-Κb、Caspase-3蛋白的表达:对于每个指标免疫组织化学评分,各处理组和对照组相比,联合用药组和单药组相比,差异均有统计学意义(p<0.05)。5流式细胞术结果显示:对照组、手霉素组、顺铂组、联合用药组,细胞凋亡率逐渐升高,分别为5.24±0.94%、12.16±1.08%、17.41±2.26%、22.93±3.22%,细胞周期G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显。结论:1手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用呈时间-剂量依赖关系,手霉素与顺铂联合应用可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用。2手霉素可抑制3AO细胞裸鼠移植瘤的生长,手霉素与顺铂联合应用抑瘤效果增强。3手霉素可使3AO细胞,细胞周期阻滞于G2/M期,诱导其凋亡,手霉素与顺铂联合应用诱导3AO细胞凋亡作用增强。4手霉素可通过抑制NF-κB、VEGF、Survivin蛋白的表达,增加Caspase-3蛋白的表达,增强3AO细胞对顺铂的敏感性。