基于click反应和纳米金体系的新型免疫分析方法研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:schunter
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本论文中,建立了一种基于click反应和纳米金的可视化免疫分析的新方法。可视化检测因为可以通过肉眼读出而具有操作简单、检测快捷等特点,金纳米颗粒因其良好的光学特性近年来被广泛应用于可视化分析中,例如对金属离子,小分子,DNA分子,蛋白质分子,癌细胞等物质的检测。课题组在之前的工作中,发展了一种基于click反应检测Cu2+的金纳米颗粒可视化检测体系,Cu2+被还原剂还原成Cu(Ⅰ),催化末端带有炔基和叠氮基的功能化金纳米颗粒发生交联,金纳米颗粒的SPR峰发生红移,导致金纳米颗粒溶液的颜色发生变化,通过肉眼即可读出结果。这种方法具有很高的选择性,不受其他离子和分子的干扰,同时在检测过程中不需要大型复杂的分析仪器,期望利用这一结果进行免疫分析方面的研究。   获得性免疫缺陷综合症,又称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒感染所引起的一种严重的传染性疾病,目前还没有有效的治疗方法,所以通过筛查感染患者进行预防仍然是控制疾病流行的主要手段,检测血清中是否含有HIV抗体是目前主要的筛查方法。由于艾滋病在许多落后不发达地区流行,所以简便、灵敏的检测方法有着十分迫切的需求。传统的HIV检测方法是通过酶联免疫吸附实验进行检测的,抗体的标记物通常为酶标分子,荧光分子和化学发光分子,这些标记方法都需要复杂的仪器进行读出,检测过程需花费大量的时间和劳动力,不利于在落后不发达地区开展和推广。为探索简单、便捷的免疫分析方法,本论文应用基于click反应的金纳米颗粒检测体系进行可视化免疫分析,得到如下结果:   1.优化了金纳米颗粒检测Cu2+的可视化检测体系,对配体结构,溶剂比例,配体与稳定剂的比例以及金纳米颗粒粒径的大小等条件进行了优化,得到的新的Cu2+检测体系更加灵敏,对Cu2+的检出限为1μM,并且在10分钟内即可完成检测,与原来相比大大缩短了检测时间,提高了检出限;   2.建立了一种基于click反应和纳米会体系的可视化免疫分析的新方法,氧化铜纳米颗粒作为标记物标记在二抗上,取代了传统酶联免疫吸附实验中的荧光分子和酶标分子,然后用盐酸将标记物中的Cu2+释放出来,通过对Cu2+的检测实现对一抗的间接检测,同时用这种方法对HIV感染病人的血清样品进行了检测,可以用肉眼区分阳性样品和阴性样品,成功的实现了免疫分析的可视化。   期待这种新型的可视化免疫分析方法能够广泛的应用于基础的生化分析和基于免疫应答的重大疾病的临床诊断,同时也为其他金属离子作为标记物,实现对生物分子的间接检测提供基础研究成果。  
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