利用GAL4/UAS系统筛选人类功能基因及Ras在果蝇眼中抑制细胞凋亡的机制

来源 :复旦大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:lbw001001
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人类基因组测序的工作已经完成,如何来了解这些基因的功能是目前我们面临的最大问题和挑战。利用GAIAL4/UAS二元表达系统,我们将人类的基因在果蝇的不同组织中过量表达,寻找过量表达后会导致果蝇发育异常的基因。利用这种方法,我们在果蝇系统中高通量筛选人类功能基因,并通过转基因果蝇的表型来推断该基因的功能。在随机挑选的61个人类基因中,有6个基因在果蝇不同的组织中过量表达可以导致果蝇出现异常表型。对其中一个基因进行深入研究后,我们发现它是一个与自身免疫疾病相关的基因。该结果表明,在果蝇系统中利用GAL4/UAS二元表达系统高通量筛选人类功能基因并帮助揭示基因功能是一个非常好的方法。   在利用GAL4/UAS二元表达系统高通量筛选人类功能基因过程中,我们分离出一个raskp突变的果蝇品系。在果蝇眼中Ras信号通路可以通过下调Hid蛋白的活性来抑制细胞凋亡。然而通过对raskp(ras基因的基因失活突变体)果蝇的研究,我们发现在果蝇眼睛的发育过程中,Ras还可以通过调节JNK信号通路的活性来抑制细胞凋亡。研究表明,抑制hid基因的活性并不能完全抑制住raskp果蝇眼细胞的凋亡。抑制JNK信号通路的活性则可以显著的抑制住raskp果蝇眼细胞的凋亡。而且在raskp果蝇眼睛中,JNK信号通路的活性是被上调的。如果在raskp果蝇的眼中抑制JNK信号通路的同时过量表达p35可以几乎完全抑制raskp果蝇眼细胞的凋亡。这个结果说明,在果蝇眼睛中Ras通过抑制JNK和Hid的活性来促进细胞的存活。我们还发现,Ras在翅膀中活性的降低会导致细胞变小而不是像在果蝇眼睛中会导致细胞凋亡。这说明,Ras基因表现出来的功能和细胞背景相关。
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