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黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是迄今所知毒性最强的物质,具有强烈的肝毒性和高致癌性。黄曲霉毒素B1主要损害动物机体肝脏,并对机体造血机能、消化机能和免疫功能等产生不良影响,导致动物生长受阻、饲料转化率降低、免疫力下降、繁殖力减弱、贫血、黄疸等。近年来研究试验动物黄曲霉毒素B1中毒文献报道已较多,但硒与中药对黄曲霉毒素B1诱导试验动物肝线粒体功能变化影响的研究仍较少。
本研究以雏鸭为试验动物,7日龄雏鸭120只,共分为四组,每组各30只。第1组设为空白对照组,灌胃同等量二甲基亚砜;第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组,每天分别按0.1 mg/kg剂量给雏鸭灌胃AFB1(以二甲基亚砜溶解)一次,灌胃至雏鸭28日龄。同时,在第Ⅲ组雏鸭日粮中添加2％复方中药,给第Ⅳ组雏鸭每天按1 mg/kg剂量灌胃亚硒酸钠(Na2SeO3)1次。在雏鸭14、21与28日龄时,分别观察雏鸭生长性能、肝功能、肝脏组织结构变化和AFB1对雏鸭肝细胞凋亡的诱导效应;检测AFB1对雏鸭肝线粒体呼吸功能、线粒体膜通透性、线粒体呼吸链复合体活性与线粒体抗氧化功能的影响;观察AFB1对雏鸭肝线粒体DNA(mitochondrial DNA Displacement-loop,mtDNA D-loop)区突变的诱导效应。同时,重点研究在试验雏鸭基础日粮中添加复方中药或给雏鸭灌胃投用亚硒酸钠(Na2SeO3),对AFB1诱导雏鸭肝脏及其线粒体功能变化的影响,试验结果如下:
(1)黄曲霉毒素B1能显著影响雏鸭生长性能与肝功能,复方中药与亚硒酸钠均能显著提高AFB1中毒雏鸭体重与日增重(P＜0.05),显著降低死亡率与料肉比(P＜0.05);复方中药与亚硒酸钠均能显著提高AFB1中毒雏鸭血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine amino transferase,ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate amino transferase,AST)活性(P＜0.05)。试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均能缓解AFB1对雏鸭生长性能与肝脏功能的影响。
(2)黄曲霉毒素B1导致雏鸭肝组织出现明显的病理变化,肝细胞出现变性、肿胀、坏死等;雏鸭肝细胞线粒体发生明显肿胀,线粒体膜完整性受到破坏,部分线粒出现空泡化等。复方中药与亚硒酸钠均能改善AFB1导致的雏鸭肝组织病理变化。
(3)黄曲霉毒素B1显著影响雏鸭肝组织及其线粒体抗氧化功能,复方中药与亚硒酸钠均能显著提高AFB1中毒雏鸭超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase,GR)活性与总抗氧化能力(Total-antioxidant capacity,T-AOC)(P＜0.05),同时显著降低丙二醛(Malondialdehytra,MDA)含量(P＜0.05)。试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均能提高AFB1中毒雏鸭肝组织及其线粒体抗氧化功能。
(4)黄曲霉毒素B1显著影响雏鸭肝线粒体呼吸功能与膜通透性(P＜0.05),复方中药与亚硒酸钠均能显著提高AFB1中毒雏鸭肝线粒体呼吸功能与降低肝线粒体膜通透性(P＜0.05),试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均能缓解AFB1对雏鸭肝线粒体呼吸功能和肝线粒体膜通透性的影响。
(5)黄曲霉毒素B1导致雏鸭肝线粒体呼吸链复合体活性显著下降(P＜0.05),复方中药与亚硒酸钠均能显著提高AFB1中毒雏鸭呼吸链复合体活性Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性(P＜0.05)。试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均能缓解AFB1对雏鸭线粒体呼吸链复合体活性的影响。
(6)黄曲霉毒素B1显著影响雏鸭肝细胞凋亡相关蛋白的表达水平,复方中药与亚硒酸钠均能显著增高肝细胞凋亡相关基因P53、Bax、Caspase-3表达水平(P＜0.05),显著降低Bcl-2表达水平(P＜0.05),降低肝细胞凋亡程度。试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均具有缓解AFB1诱导雏鸭肝细胞凋亡的功效。
(7)黄曲霉毒素B1导致雏鸭肝mtDNAD-loop区发生突变,包括点突变、缺失突变和插入突变,复方中药与亚硒酸钠均具有缓解AFB1诱导雏鸭肝mtDNA D-loop区突变的功效。
本研究表明,黄曲霉毒素B1能显著影响试验雏鸭肝脏及其线粒体功能,而复方中药与亚硒酸钠均能显著提高.AFB1中毒雏鸭生长性能与肝脏功能(P＜0.05),降低雏鸭肝细胞凋亡程度;复方中药与亚硒酸钠均能显著改善AFB1中毒雏鸭肝线粒体功能,主要表现为显著提高线粒体呼吸功能、线粒体呼吸链复合体活性和线粒体抗氧化功能与显著降低线粒体膜通透性(P＜0.05);复方中药与亚硒酸钠均能缓解AFB1中毒雏鸭肝mtDNA D-loop区发生突变。试验结果表明,复方中药与亚硒酸钠均能显著缓解AFB1对雏鸭肝脏及其线粒体的毒性作用,且亚硒酸钠的功效明显优于复方中药。