目的：线粒体自噬(mitophagy)是细胞对损伤线粒体的自我清除过程，是保持细胞内线粒体质量和数量动态平衡的重要环节。它发生在多种神经退行性疾病中，包括缺血性脑卒中。已有研究发现，在脑缺血再灌注损伤模型中，可以通过对线粒体自噬的调节产生神经保护作用从而减轻脑损伤。Β-石竹烯(BCP)是一种双环倍半萜型的天然产物且其可以通过抗凋亡，抗氧化应激对脑缺血再灌注损伤起到神经保护作用，但其是否可以通过调节线粒体自噬对脑缺血再灌注损伤起到保护作用及其机制尚不明确。本课题将研究BCP是否能通过调节线粒体自噬来改善缺血再灌注引起的脑损伤，及其涉及的相关机制。
　　方法：1.体内实验：C57BL/6J♂小鼠随机分为五组：正常组(Sham组)，模型组(I/R组)，给药组(BCP组)，BCP+线粒体自噬抑制剂组(BCP+Mdivi-1组)，线粒体自噬抑制剂组(Mdivi-1组)，采用线栓法建立短暂小鼠大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO)模型。各组小鼠术前连续灌胃给药5d(BCP， 72 mg.kg-1)，Mdivi-1(50 mg.kg-1)则在再灌注时腹腔注射。术后24h行TTC染色观察脑梗死体积，神经行为学评分观察神经功能缺损情况，HE染色观察缺血侧海马区神经元病理变化，免疫荧光染色及WesternBlot法检测损伤部位自噬相关蛋白LC3、P62及线粒体膜蛋白TOM20，离子通道蛋白VDAC1的表达情况，使用透射电镜观察损伤部位自噬发生情况，检测细胞ATP的含量及线粒体膜电位水平(Mitochondrial Membrane Potential，MMP)评估各组线粒体功能。2.体外实验：体外培养HT22细胞系，然后将细胞随机分为5组：无任何处理的正常对照组(Control组)，糖氧剥夺再灌注模型组(OGD/R组)，BCP治疗组(BCP组)，BCP+线粒体自噬抑制剂组(BCP+Mdivi-1组)，线粒体自噬抑制剂组(Mdivi-1组)。细胞培养至80%左右后建立唐氧剥夺再灌注(OGD/R)模型。建立模型前BCP(10μM)预处理12h，Mdivi-1(25μM)则在复氧时加入。糖氧剥夺2h，再灌注24h后收取样本做相关检测。我们采用了MTT法检测细胞活性，流式细胞技术检测各组细胞的死亡率，Western-blot法检测线粒体自噬相关蛋白LC3，P62，PINK1，PARK2和线粒体膜蛋白TOM20的表达，GFP-LC3以及TOM20荧光染色共定位检测线粒体自噬动态流，免疫荧光双标法检测海马神经元中PARK2/VDAC1的重叠率,荧光定量PCR检测线粒体DNA含量，透射电镜观察HT22细胞线粒体自噬的情况。检测ATP含量和线粒体膜电位评估线粒体功能。
　　结果：1.WB结果显示,与模型组相比，BCP组中LC3的表达明显上升，P62，TOM20的表达明显降低，免疫荧光显示GFP-LC3和TOM20的重合率明显增高，PCR结果显示线粒体DNA含量(mt-Atp6/Rpl13)明显降低，透射电镜显示有更多的自噬小体被观察到，表明BCP在体内和体外均可上调缺血再灌注诱导的线粒体自噬。2.BCP治疗组小鼠的神经行为学评分，脑梗死体积以及损伤侧海马区神经元细胞的死亡均有减少，流氏细胞术结果也显示，BCP治疗可明显降低HT22细胞的死亡率。而线粒体自噬抑制剂则可逆转这些现象。这些结果表明，BCP可以通过上调缺血再灌注后的线粒体自噬，减少神经元细胞的损伤和死亡。3.无论是在小鼠还是细胞模型上BCP治疗组中ATP含量和MMP均上升，表明BCP可以改善线粒体功能。4.WB和免疫荧光结果显示，与模型组相比，BCP组中PARK2，PINK1的表达增多，PARK2和VDAC1的重合率升高，提示BCP激活线粒体自噬的通路为PINK1/PARK2。
　　结论：研究结果表明BCP可通过上调脑缺血再灌注损伤诱导的线粒体自噬减轻神经元细胞的死亡，为治疗急性缺血性脑损伤提供了新的靶点与思路。