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目的 利用杂交瘤技术制备脐带血树突状细胞(DC)和食管癌细胞EC109融合疫苗EC109-DC，低温冰箱冻存杂交瘤苗，探讨冻存对其生物学特征、体外诱导特异性抗食管癌免疫应答能力的影响。方法 ①利用Ficoll-Hypaque密度梯度法分离脐血单个核细胞，免疫磁珠法分离脐血CD34~+干细胞，细胞因子GM-CSF(300ng／ml)、TNF-α(150u／ml)和SCF(200ng／ml)诱导分化培养，隔日分瓶培养并追加相应细胞因子及培养液，37℃、5％CO2饱湿条件下培养2周后收集分化成熟的DCs。②聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)化学融合法按5：1比例融合成熟DCs与食管癌细胞EC109，HLA-DR MicroBeads标记，Mini MACS免疫磁式细胞分选器筛选阳性细胞为融合疫苗EC109-DC。③二甲基亚枫(Dimethyl Sulfoxide，DMSO)+葡萄糖(Glucose)为主要冷冻保护剂，—80℃低温冰箱冻存融合细胞EC109-DC，3周后融冻。④台盼兰拒染法检测融冻疫苗存活率及台盼兰拒染回收率(TBR)。⑤应用细胞培养技术及光镜技术观察冻存前、后融合疫苗EC109-DC的生长特征及形态学变化，应用流式细胞分析技术鉴定冻存前、后融合疫苗免疫表型。⑥尼龙毛分离法纯化分离健康人外周血T淋巴细胞，流式细胞分析技术鉴定疫苗活化前、后T淋巴细胞表型变化。⑦四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定冻存前、后融合疫苗EC109-DC诱导T淋巴细胞体外特异性抗肿瘤免疫应答能力。结果 ①免疫磁珠法分离脐血CD34~+干细胞收获率为0.8％—1.10％。倒置相差显微镜下，CD34~+干细胞呈小圆形，悬浮生长。②脐血CD34~+干细胞在细胞因子GM-CSF、TNF-α和SCF诱导下增殖分化，第3天开始出现形态不规则细胞，并有簇状细胞集落形成；7天时集落明显增大，边缘毛刺状；10天时集落变小，周围分布较多形态不规则、半悬浮生长细胞；2周时集落数量明显减少，半悬浮生长细胞增多，呈成熟的DCs形态。③EC109和DCs可在体外经PEG化学融合法成功融合，融合疫苗EC109-DC体外呈半悬浮生长，胞核大或双核，甚至多个胞核，