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第一部分hMIC-1抗体的研制及鉴定目的:制备人巨噬细胞抑制因子-1(hMIC-1)的单克隆抗体与多克隆抗体,为建立MIC-1免疫学检测方法和功能研究奠定物质基础。方法:以酵母表达的hMIC-1重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤技术制备抗bMIC-1单克隆抗体,采用间接ELISA和Western blot等方法鉴定抗体的亚类、特异性等特性。采用免疫组织化学等常规检测方法进一步检验抗体的特异性及可能的用途。此外,将hMIC-1重组抗原经多次多点免疫新西兰大耳白兔,制备得到兔抗hMIC-1抗血清,纯化后鉴定抗体的特异性,并初步探索建立ELISA检测方法的可行性。结果:获得1株可稳定分泌抗hMIC-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G7。Westernblot鉴定表明2G7单抗能够特异识别重组hMIC-1及人结肠组织表达的还原型与非还原型MIC-1,与酵母粗提取物无交叉反应。应用2G7抗体免疫组化检测MIC-1在结肠癌、前列腺癌表达情况,结果表明MIC-1分布于细胞浆,呈强阳性着色,与商售MIC-1单抗相一致。应用2G7抗体的免疫组化片背景更低,显示出2G7抗体具有较好的特异性。兔抗重组hMIC-1多克隆抗体能够识别天然hmIC-1,血清抗体效价为10~5,但不能与2G7单抗配对检测hMIC-1。结论:以酵母表达的重组hMIC-1作为免疫原能够用于制备抗hMIC-1单克隆抗体杂交瘤。本研究获得了1株针对hMIC-1的单克隆抗体瘤株,产生的抗体能应用于hMIC-1 Western blot检测。第二部分胰腺癌患者血清中MIC-1升高的临床价值目的:探讨MIC-1作为新的肿瘤标志物在胰腺癌临床血清学诊断中的应用价值。方法:采用双夹心酶联免疫方法检测101例胰腺癌,10例胰腺良性病变患者及50例正常人血清中的MIC-1表达水平,并与肿瘤标记物CA199进行比较研究。结果:胰腺癌患者血清中MIC-1表达水平(1427±1056 ng/L)显著高于胰腺良性肿瘤(362±177 ng/L)和正常人血清水平(299±159ng/L)(P＜0.001)。MIC-1检测胰腺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和AUC值依次为81.2%,94%,96.5%,71.2%和0.92,分别高于CA199的相应对应值72.4%,89.6%,93.4%,61.4%和0.86,与CA199联合检测的敏感性可提高至91.1%。结论:MIC-1具有成为胰腺癌临床诊断的新肿瘤标记物的价值,与CA199联合检测有助于提高对胰腺癌的诊断。