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卵黄抗体(Egg Yolk immunoglobulin, IgY)是禽类经特定抗原免疫后产生并贮存在卵黄中的特异性抗体,广泛应用于动物感染性疾病的防治。IgY的抗病机理目前尚未完全阐明,在本课题组前期研究基础上,本论文从体内和体外两方面进一步探讨IgY对肠道黏膜免疫系统的调节作用,是对特异性IgY防治感染性疾病作用机理的重要补充。本研究以灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫蛋鸡制备特异性IgY。酶联免疫吸附(ELISA)法检测抗体效价,结果表明抗体效价达到最高值为1：12000,抗体高效价(≥6000)可持续16周。采用水稀释-两步盐析-超滤技术分离纯化IgY,最终获得抗体纯度可达80%。体外抑菌实验表明,特异性IgY能有效抑制病原菌的生长且该抑制作用呈剂量依赖性,浓度为20mg/ml时抑菌效果最明显,抑菌率达50%。免疫荧光和免疫电镜结果表明,特异性IgY与病原菌特异性结合,且粘附于其表面。建立鼠伤寒沙门氏菌昆明小鼠肠道感染模型24h后,分别给予特异性IgY、非特异性IgY和PBS,期间观察小鼠的存活率和体重变化。持续3天后,处死并解剖小鼠,取小肠段,制作病理切片和超薄切片用于组织病理学检测和小肠上皮细胞超微结构的观察；ELISA法检测髓过氧化物酶(MPO)的含量以探讨嗜中性粒细胞的活化和增殖状态。另外,免疫组织化学法检测空肠中T淋巴细胞及其亚型细胞数量的变化。结果表明,特异性IgY可以有效地降低感染小鼠的死亡率,增加小鼠的体重,且显著改善肠道的病理状态(如黏膜损伤、绒毛肿胀断裂等),有效缓解肠道炎性细胞浸润状态并保持小肠上皮细胞结构和细胞器的完整。另外,特异性IgY显著降低攻毒导致的MPO含量的升高(降低64%),显著缓解嗜中性粒细胞的过度激活和炎性浸润(P<0.05)。特异性IgY显著降低攻毒导致的T淋巴细胞(CD3)、辅助T淋巴细胞(CD4+)、细胞毒性T淋巴细胞(CD8+)和Tγ&淋巴细胞数量的显著增加(P<0.05),分别降低45%、50%、76%和25%,从而缓解肠道应激导致的炎症反应和肠道黏膜免疫应答的过度激活状态。巨噬细胞是鼠伤寒沙门氏菌等胞内病原体的主要宿主,本研究考察病原菌与巨噬细胞共同培养时,特异性IgY对巨噬细胞吞噬作用和NO含量的影响。流式细胞仪检测结果表明,特异性IgY显著增强巨噬细胞的吞噬率(P<0.05)且浓度为5mg/ml时对巨噬细胞吞噬率增强作用最显著,吞噬率由11%升高至62%。另外,特异性IgY显著减少了鼠伤寒沙门氏菌诱导的NO的释放(P<0.01),NO的释放量由111.5μmol/L降低到3.35μmol/L,通过调节免疫应答和免疫效应等非吞噬调理方面发挥作用。