论文部分内容阅读
研究背景:免疫功能紊乱贯穿脓毒症整个病理过程,由早期的促炎介质增加向抗炎免疫抑制状态转变,乃至终末期的免疫无反应。最近研究发现作为细胞核内非组蛋白的高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)参与了脓毒症病理过程,并成为脓毒症治疗研究潜在的重要干预目标之一。然而,HMGB1与机体免疫功能间的关系尚有待探讨。 目的:观察HMGB1对巨噬细胞及淋巴细胞免疫功能的影响,以及休克期切痂对烫伤后HMGB1的产生与机体免疫的可能作用,并探讨HMGB1参与脓毒症免疫功能紊乱的分子机制。 方法:(1) 用不同浓度HMGB1刺激体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和牌淋巴细胞,中性红吞噬试验检测巨噬细胞吞噬,MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞术检测巨噬细胞I-A/-E表达及淋巴细胞凋亡、Th1/Th2和Tc1/Tc2亚群变化。(2) 用0.2μg或20μg HMGB1攻击小鼠,同上检测腹腔巨噬细胞、脾和潘氏结淋巴细胞免疫功能:同时,ELISA法检测培养上清和血浆IL-2/sIL-2R变化。(3) 制作30%Ⅲ度烫伤大鼠模型,随机分为24h和72h切痂植皮组,RT-PCR法检测肝、肺组织HMGB1、IL-10、TNF-α基因表达,免疫组化染色观察肝、肺HMGB1表达,Western-blotting法检测血浆HMGB1水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖,ELISA法检测肝、肺组织IL-10、TNF-α及血浆和肠组织IL-2,RIA法检测肠黏液分泌型IgA含量,生化法检测血浆ALT和AST、肠组织DAO、肺组织MPO活性。中交摘要结果:仁1) HMGBI能时间一剂量依赖性地影啊培养小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,不能影响其I一A八E表达。(2)不同培养时相及不同HMGBI浓度刺激对脾淋巴细胞增殖有不同的影响。(3)不同HMGBI浓度和不1司刺激时间对淋巴细胞Thl、ThZ及Thl/Th2比例变化无明显影响。(4)培养12h,IOng/mlHMGBI刺激上清中IL一2活性增加,IL一2/sIL一ZR升高。(5)高剂量HMGBI攻击24h,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用显著抑制:低剂量HMGBI攻击48h,巨噬细胞I一A/一E表达明显增加。(6)高剂量HMGBI攻击24h,脾淋巴细胞增殖反应抑制,48h凋亡淋巴红{1饱增力!1。(7)HMGBI攻击后脾淋巴细胞Thl减少;低剂量HMGBI攻d、48 h ThZ增加,而高剂量HMGBI攻击48 h ThZ减少;高剂量HMGBI攻击,脾淋巴细胞Tcl减少,TcZ增多。(8)高、低剂量HMGBI攻击24h均能促进潘氏结淋巴细胞增殖,减少细胞凋亡;低剂量HMGBI攻击48h淋巴细胞增殖反应进一步增强,而高剂量HMGBI组淋巴细胞增殖明显抑制,但淋巴细胞凋亡率均增加。(9) HMGBI攻击后潘氏结淋巴细胞Thl和ThZ成倍增多,Thl/Th2比值降低;HMGBI攻击后Tcl增加,Tcl/TcZ比值成倍升高,尤以低剂量组24h最明显。 (10)高剂量HMGBI攻击48h血浆IL一2减少,IL一2/slL一ZR比值下降。 (11)烫伤导致大鼠肝、肺组织HMGBI基因和蛋白表达上调,HMGBI可易位至胞浆或细胞外,血_浆HMGBI水平升高;大鼠肝、肺组织一fNF一a/IL一10基因私l蛋自表达比例上升;大鼠全身和肠道局部免疫功能明显降低。(12)切痴有助于减少烫伤大鼠组织HMGBI基因和蛋白表达量,降低血浆HMGBI浓度,有助于组织TNF一留IL一10间平衡的恢复,同时全身和肠道局部免疫功能及肝、肺、肠生化指标的改善。24h切痴较72h切痴大鼠上述指标变化明显提前。(13)烫伤大鼠血浆HMGBI浓度与脾淋巴细胞增殖、血一浆IL一2浓度及肠组织DAO活性显著负相关,中交J南要,。)Jl一到}_织I’NF一a/比一10蛋自比值显著正相关。结论:(1) HMGBI能时间一剂量依赖性地影响离体培养的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,而不影响巨噬细胞I一A八E表达;高剂量HMGBI攻击抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;低剂量HMGBI攻击上调巨噬细胞I一A/一E的表达。(2)不同HMGBI浓度和不同刺激时间对淋巴细胞Thl、ThZ及Tcl、TcZ亚群变化无明显影响。高剂量HMGBI攻击后,小鼠脾淋巴细胞增殖明显抑制,凋亡增加。低剂量HMGBI攻击,ThZ增加;高剂量HMGBI攻击,Tcl、ThZ减少,TcZ增多。潘氏结淋巴细胞Thl/T hZ及Tcl/TcZ亚群变化与脾淋巴细胞截然相反。高剂量HMGBI攻击后IL一2减少,IL一2/sIL一ZR比值下降。(3)休克期切痴能减少烫伤大鼠HMGBI产生,促进全身和肠道局部免疫功能恢复,肝、肺组织促炎/抗炎平衡及脏器功能指标得以改善;烫伤后HMGBI大量产生可能参与了全身和肠道局部免疫功能障碍的病理过程。