夏至草多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究

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夏至草为唇形科夏至草属植物夏至草(Lagopsis supina)的全草。又名小益母草、白花益母草、白花夏枯草等。广泛分布于华北、东北、西南、西北等地区。《本草纲目》中记载的茺蔚白花者应是夏至草,可活血去瘀、调经、降气逆、平肝潜阳,用于月经不调、半身不遂、血滞经闭、贫血性头昏等疾病。通过现代药理研究表明,夏至草醇提物具有明显的活血化瘀作用以及抗氧化作用。多糖是广泛存在于植物、动物、微生物组织中的一类天然高分子化合物,是维持生命正常运转的基本物质之一,具有抗氧化、抗衰老、调节免疫等多种生理活性,且无毒副作用。夏至草多糖是夏至草主要的活性成分之一,因此对其进行深入系统的研究将能为夏至草资源的进一步开发利用提供必需的理论依据。目前,夏至草多糖的研究尚未见报道,本课题选取张家口地区的夏至草为材料,对夏至草多糖的提取、分离纯化、生物活性等方面进行了比较系统的研究,旨在为天然资源的综合利用提供先进的技术支持,对进一步深入开发利用夏至草资源具有重要的意义。本文首先采用常规回流提取法和超声波提取法对夏至草多糖进行了提取,比较二者的多糖提取率,结果常规回流提取法多糖提取率为2.36%,而超声波提取法的多糖提取率只有0.18%。通过单因素试验和正交试验,优化了夏至草多糖常规回流提取的提取工艺。确定夏至草多糖常规回流提取最佳工艺条件为:提取温度100℃,提取时间2.5h,料水比1:20,提取两次。在该条件下夏至草多糖的提取率为2.32%。其次,选用了一些大孔吸附树脂和阴离子交换树脂对夏至草粗多糖进行了脱色、脱蛋白的实验研究,以脱色率、蛋白去除率和多糖保留率及3个指标的加权综合评分为依据,比较D-101、DM-301、AB-8、 AES-7、ADS-7等大孔吸附树脂和阴离子交换树脂对夏至草多糖的脱色、脱蛋白效果,筛选出大孔吸附树脂ADS-7效果最好,其脱色率、蛋白去除率和多糖保留率分别为94.6%、91.2%和64.3%。通过正交试验,进一步优化ADS-7脱色、脱蛋白的工艺条件为:温度45℃,时间1.5h,料水比1:40。经脱色、脱蛋白的夏至草多糖通过DEAE-52纤维素和SephadexG-150凝胶柱层析,进行进一步分离纯化,得到了LSP1和LSP2两个个多糖分级组分,经HPGPC鉴定为均一多糖。经HPGPC测定LSP1和LSP2的分子量分别为111905Da和2540364Da。本文最后通过水杨酸-Fe2+-H2O2体系、二苯代苦味肼基自由基(·DPPH)体系和邻苯三酚自氧化法对分离纯化的2个夏至草均一多糖组分的抗氧化作用进行了研究。实验结果表明,在清除.OH方面,LSP2>LSP1。当浓度达到200mg.L-1时,清除率分别为72.2%和30.5%,而且LSP1和LSP2对羟基自由基的清除作用均弱于维生素C。在清除.DPPH方面,LSP1>LSP2.当浓度达到300mg.L-1时,清除率分别为48.9%和18.2%,而且二者均远远地弱于维生素C。在清除·O2-方面,LSP1的清除作用较弱,当浓度达到200mg.L-1时,清除率仅为35.8%。LSP2在0~200mg.L-1浓度范围内,多糖能诱导·02-的产生,存在自氧化作用,因此清除超氧阴离子自由基·02-时会出现负清除率,而维生素C对·O2-的清除作用较强。
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