论文部分内容阅读
目的：研究蛋白酶体抑制剂MG132对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖和凋亡的作用，并观察MG132对Hela细胞中p27蛋白表达的影响。方法：（1）倒置显微镜观察活细胞生长情况并摄片。（2）实验组分别采用终浓度为2.5μmol／l、5μmol／l、10μmol／l、20μmol／l、40μmol／l、80μmol／l、160μmol／l的蛋白酶体抑制剂MG132培养Hela细胞，通过MTT比色法检测培养24h后细胞增殖活力，计算细胞生长抑制率和IC50；同样方法分别采用终浓度为2.5μmol／l、5μmol／l、10μmol／l、20μmol／l、40μmol／l的蛋白酶体抑制剂MG132培养Hela细胞，MTT比色法检测培养48h、72h后细胞增殖活力，并计算细胞生长抑制率。（3）分别采用终浓度为2.5μmol／l、5.0μmol／l、10μmol／l、20μmol／l的蛋白酶体抑制剂MG132培养Hela细胞48h后，流式细胞仪定量检测不同浓度组的细胞凋亡率，并用终浓度为10μmol／lMG132处理Hela细胞24h、48h、72h，流式细胞仪分别检测不同时间的细胞凋亡发生率，并分析细胞周期改变。（4）分别采用终浓度为2.5μmol／l、5.0μmol／l、10μmol／l、20μmol／l MG132处理Hela细胞48h后，免疫组化检测p27的蛋白表达。各实验中对照组除加入同等浓度的DMSO外，均不加任何干预因素。结果：（1）倒置显微镜下观察到MG132处理后凋亡细胞明显增多。凋亡细胞形态为：细胞缩小变圆，细胞膜出泡等。（2）经终浓度分别为2.5μmol／L、5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L、80μmol／L、160μmol／L MG132处理HeLa细胞24h后，细胞抑制率分别为14.13％±0.95％、21.50％±1.01％、31.33％±2.37％、33.40％±1.01％、35.77％±1.11％、79.23％±1.10％、89.62％±0.89％，IC50为62.65μmol／L；经终浓度分别为2.5μmol／L、5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L MG132处理HeLa细胞48h后，细胞抑制率分别为49.13％±1.20％、70.40％±2.17％、80.40％±1.25％、82.90％±1.71％、85.80％±1.28％，10μmol／L时抑制率即可达到80％以上；作用72h后，细胞抑制率分别为58.93％±1.63％、89.37％±1.03％、94.33％±2.06％、95.30％±1.65％、95.73％±1.75％。随MG132作用浓度升高Hela细胞抑制率增高，不同浓度MG132组HeLa细胞增殖抑制率有显著性差异（F=3569.301，P＜0.001）；随MG132作用时间延长，HeLa细胞抑制率明显上调，且各组之间的差异有统计学意义（F=6155.339，P＜0.001），MG132处理浓度与处理时间之间具有交互作用（F=272.722，P＜0.001）；（3）MG132能有效诱导Hela细胞凋亡，终浓度为2.5μmol／L、5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L MG132分别作用于HeLa细胞48h后，流式细胞仪检测细胞凋亡率分别为7.47％±0.16％、12.15％±0.52％、19.35％±0.77％、28.94％±0.18％，不同浓度MG132组与对照组的早期凋亡率有显著差异（F=1182.745，P＜0.001）。终浓度为10μmol／L MG132处理Hela细胞，24h、48h和72h细胞凋亡率分别为6.86％±0.40％、19.35％±0.77％、57.30％±3.68％，随时间延长凋亡率明显升高，差别均有统计学意义（F=357.090，P＜0.001）；且随药物作用时间延长，细胞周期被阻滞于G2／M期（F=49.206，P=0.001）。（4）实验组各组及对照组相互比较，HeLa细胞中p27蛋白表达明显上调，差别有统计学意义（PearsonX2=19.167，P＜0.05）。结论：特异性蛋白酶体抑制剂MG132能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，并促进其凋亡，其作用呈量效关系；其作用可能与MG132上调p27蛋白表达有关。