论文部分内容阅读
2018年,乳腺癌是女性中最常诊断出的恶性肿瘤,也是导致女性死亡的主要原因,给女性的身体健康和生活质量造成严重影响。越来越多的乳腺癌患者通过接受新辅助化疗,来消除全身微小转移灶和使原发病灶降期,从而为手术创造有利条件。对于HER2阳性乳腺癌,可优先选择术前新辅助化疗联合曲妥珠单抗进行治疗。治疗疗效以术后病理结果来评价。但是这种方法必须依靠手术取样,不具有可重复性,而且存在时间上的滞后,所以需要新的方法来进行简单、实时、动态地疗效评价。近几年,循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)作为新兴的“液体活检”技术之一,开始成为研究热点并在临床广泛应用。它主要来源于患者的外周血循环里的肿瘤DNA,可以用于肿瘤的早期诊断、疾病监测、疗效评估和预后预测,具有重复性好、创伤小、灵敏度高、动态性强等优势,为乳腺癌的个体化治疗提供新思路。大量研究已证明晚期HER2阳性肿瘤患者ctDNA总量和HER2基因拷贝数高于正常人,并且能随着治疗进行出现相应变化,能对肿瘤进展动态监测,评估治疗疗效。但是新辅助化疗治疗阶段的患者,其肿瘤还未进展到晚期,所以肿瘤负荷小,全身转移少。关于这一阶段的血浆ctDNA和HER2拷贝数研究较少,并且有研究结论显示新辅助化疗时期的HER2阳性乳腺癌患者与健康人之间的ctDNA总量和HER2扩增数无差异,治疗后的HER2拷贝数明显高于基线水平。这与之前在晚期肿瘤上得出的结论存在争议。出现这种结果可能与该研究当年血浆HER2拷贝数的检测技术有关。所以我们将改进检测技术,用液滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)这种可以绝对定量的方法来检测血浆HER2基因拷贝数。研究目的:本研究采用ddPCR技术,检测新辅助化疗联合曲妥珠治疗期间,HER2阳性乳腺癌患者的血浆ctDNA总量和HER2拷贝数。通过这两者基线水平和变化,来评估ctDNA总量和HER2拷贝数在乳腺癌诊断、疗效评价中的作用,同时对比血浆和石蜡包埋组织中的HER2扩增一致性,来探索血浆HER2扩增检测是否有成为组织HER2扩增检测的补充的潜力。研究方法:1.HER2阳性乳腺癌患者和健康人的血浆ctDNA总量和HER2拷贝数差异(1)从西京医院甲乳血管外科纳入2017年6月-2019年2月经病理确认为HER2阳性乳腺癌患者43例,作为乳腺癌组。从西京医院体检门诊纳入健康人40例,作为对照组。(2)抽取HER2阳性乳腺癌患者治疗前(基线期)外周血和门诊健康人体检时外周血5ml,共83例。(3)检测血浆中的ctDNA总量,用ddPCR检测血浆中的HER2拷贝数。(4)比较HER2阳性乳腺癌患者和健康人的血浆ctDNA总量和HER2拷贝数差异。2.HER2阳性乳腺癌患者治疗前后血浆ctDNA总量和HER2拷贝数变化(1)以最终完成整个术前新辅助化疗联合曲妥珠单抗治疗方案的HER2阳性乳腺癌患者为研究对象,第一部分的43例经排除13例后还有30例。(2)抽取治疗后(术前)外周血5ml共30例。(3)检测血浆中的ctDNA总量,用ddPCR检测血浆中的HER2拷贝数。(4)比较HER2阳性乳腺癌患者治疗前后血浆ctDNA总量和HER2拷贝数差异。3.HER2阳性乳腺癌患者石蜡包埋组织和基线期血浆中HER2扩增一致性(1)从西京医院病理科收集上述30例HER2阳性乳腺癌患者确诊时匹配的石蜡包埋组织30例。(2)提取石蜡包埋组织中的DNA。(3)用ddPCR检测组织中的HER2扩增情况。(4)分析ddPCR检测的组织HER2扩增和基线期血浆中HER2扩增一致性。结果:1.共纳入HER2阳性乳腺癌患者43例,健康人40例,全为女性。临床特征:年龄、激素受体、肿瘤大小、淋巴结转移与基线期ctDNA总量不相关,(P值分别为0.43、0.16、0.70和0.38),与基线期HER2拷贝数水平也不相关(P值分别为0.95、0.75、0.94和0.79)。HER2阳性乳腺癌患者基线期ctDNA总量中位数434.0ng/ml,95%CI 465.2-859.7 ng/ml,健康人基线期ctDNA总量中位数356.0ng/ml,95%CI334.0-475.7 ng/ml,有显著性差异(P≤0.05)。HER2阳性乳腺癌患者基线期HER2拷贝数中位数1.3,95%CI 1.2-1.36,健康人基线期HER2中位数0.98,95%CI 0.95-1.03,有显著性差异(P≤0.05)。2.经新辅助化疗联合曲妥珠单抗治疗过程中,有13名患者被排除,进入研究第二部分的为30名患者。临床特征:年龄、激素受体、肿瘤大小、基线期、淋巴结转移、化疗方案与治疗前、后的ctDNA总量和血浆HER2拷贝数不相关(P>0.05)。患者治疗前后的血浆ctDNA总量没有显著性差异(P>0.05),血浆HER2拷贝数却有显著性差异(P≤0.05),出现下降。用软件计算得出ddPCR检测血浆HER2拷贝数的扩增界值为1.25。HER2拷贝数≥1.25为HER2拷贝数扩增,HER2拷贝数<1.25为无扩增。最后达pCR的患者有10例,其中3例基线期HER2无扩增,7例有基线期的HER2扩增,未达pCR的患者有20例,其中9例基线期HER2无扩增,11例有基线期的HER2扩增。达pCR与未达pCR的患者基线期的HER2扩增情况和HER2拷贝数都没有显著性差异(P>0.05)。3.用软件计算得出ddPCR检测FFPE组织HER2拷贝数的扩增界值为2.1。FFPE组织的HER2拷贝数≥2.1为HER2拷贝数扩增,HER2拷贝数<2.1为不扩增。经Kappa检验分析,FFPE组织的HER2扩增和基线期血浆HER2扩增的Kappa值为0.12,说明两者的一致性差。结论:1.HER2阳性乳腺癌患者ctDNA总量基线值显著高于健康人对照组(P≤0.05),HER2拷贝数基线值也显著高于健康人对照组(P≤0.05),对HER2阳性乳腺癌患者有辅助诊断作用。临床特征:年龄、激素受体、肿瘤大小、淋巴结转移与ctDNA总量基线值和HER2拷贝数基线值无明显相关。2.HER2阳性乳腺癌患者治疗前后的ctDNA总量无显著性差异,而HER2拷贝数显著下降,说明HER2拷贝数变化对于评估临床疗效有参考价值。但是达pCR患者与未达pCR的患者基线的HER2拷贝数没有差异,说明单一血浆HER2拷贝数尚不能用于预测患者治疗效果。3.HER2阳性乳腺癌患者的基线血浆HER2拷贝数检测与FFPE组织的HER2拷贝数检测一致性差,ddPCR血浆HER2拷贝数检测不能替代ddPCR组织HER2拷贝数检测。