植物乳杆菌亚油酸异构酶的纯化及其应用研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suhuisu
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本文研究了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum LT2-6)产亚油酸异构酶的适宜条件,分离纯化了该亚油酸异构酶,确定了该酶的基本性质,并初步探索了菌株及酶在提高豆渣中共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)含量的应用。 L.plantarum LT2-6能够在细胞内诱导生成亚油酸异构酶,具有将亚油酸(LinoleicAcid,LA)转化成CLA的能力。实验结果表明,菌株L.plantarum LT2-6产亚油酸异构酶的适宜条件为:温度37℃,初始pH6.5,微氧环境,摇床转速120r/min,LA浓度0.075%(诱导酶的生成),发酵时间22~24h,生成的CLA为cis,trans-9,11-CLA。在发酵液中加入适量青霉素(28.8~115.2×103U/m1),易于细胞破壁,并不会显著降低亚油酸异构酶的生成。 离心发酵液收集细胞,经超声波破碎、硫酸铵分段盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析,分离纯化得到亚油酸异构酶,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上均呈现一条蛋白带,分子量约为43kDa。酶学性质研究结果表明,该酶最适反应条件为:温度30℃,pH6.0,LA浓度1.5x105g LA/ml;CO2+、Fe2+提高酶的活性,Cu2+、Zn2+抑制酶的作用;以亚油酸为底物时,酶的Km=2.53x105mol/L,Vmax=2.57×10-8 mol/(min.mg)。 利用L.plantarum LT2-6发酵提高豆渣中CLA含量的适宜条件为:温度30℃,水分80%,加入1%COCl2,发酵3天以上,经发酵可使豆渣中CLA的含量增加450μg CLA/g干豆渣。利用亚油酸异构酶提高豆渣中CLA含量的适宜条件为:温度30℃,水分80%,反应7.5h以上,缓冲液pH5.0~7.5之间,经酶处理可使豆渣中CLA的含量增加约330μg CLA/g干豆渣。
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