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目的：野生型p53在监控细胞基因组DNA的完整性上发挥着“基因组卫士”的作用。正常情况下，细胞内p53蛋白的表达水平很低。细胞DNA受到损伤时，p53转录被激活并诱导其下游靶基因表达，从而发挥调控细胞周期、促凋亡的生物学作用。最近的研究表明，黑色素瘤相关抗原MAGE-A亚家族的一些成员与p53之间可发生相互作用，MAGE-A可抑制p53的转录活性，并可与MDM2结合，促进p53泛素化和降解，从而阻碍了肿瘤抑制因子p53功能的发挥。本课题旨在研究MAGE-A亚家族中MAGE-A9对p53转录活性及稳定性的影响，进而了解MAGE-A9在肿瘤发生发展中可能的信号通路及作用机制。方法：1利用基因转染、RT-PCR、Western Blot、荧光素酶报告基因分析等方法检测外源性MAGE-A9对p53靶基因p21WAF1表达的影响。2通过细胞克隆形成以及MTT实验分析基因转染后MDA-MB-231细胞的增殖活性。3利用基因转染、RT-PCR、Western Blot研究MAGE-A9对p53表达的影响。4采用放线菌酮蛋白合成抑制实验，分析不同转染组MDA-MB-231细胞中p53蛋白在放线菌酮作用不同时间后的表达情况。结果：1RT-PCR分析结果显示，与转染空载体组相比，转染p53基因可以使MDA-MB-231细胞中p21WAF1mRNA表达水平增加（P＜0.05）；共同转染p53基因和MAGE-A9基因后，p21WAF1mRNA表达水平均明显低于单独转染p53基因时的表达水平（P＜0.05）；单独转染MAGE-A9基因后，MDA-MB-231细胞中p21WAF1mRNA表达水平与转染空载体组无明显差异（P＞0.05）。2Western Blot分析结果显示，转染p53基因后，MDA-MB-231细胞中p21WAF1蛋白表达水平明显高于p53未转染组（P＜0.05）；与单独转染p53组相比，共转p53和MAGE-A9质粒组MDA-MB-231细胞中p21WAF1蛋白的表达水平明显降低（P＜0.05）。3荧光素酶报告基因分析结果显示，对照组MDA-MB-231细胞的荧光素酶活性为1.00±0.00；在单独转染25ng p53质粒组MDA-MB-231细胞，p21WAF1启动子介导的荧光素酶活性为58.56±3.47，与对照组相比明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；共转染25ng p53质粒和逐渐增加量MAGE-A9质粒（100ng、200ng、400ng）后，MDA-MB-231细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶活性分别为49.40±5.74、35.93±2.27、22.48±4.98，与单独转染p53组相比明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。4克隆形成实验结果显示，在MDA-MB-231细胞系中，转染空载体组，G418抗性的细胞克隆数为143.50±11.39；单独转染p53质粒组，G418抗性的细胞克隆数为53.25±6.08，与空载体对照组相比显著降低（P＜0.05）；共同转染p53质粒和MAGE-A9质粒组MDA-MB-231细胞，G418抗性的细胞克隆数为115.50±7.94，与单独p53质粒组相比显著增加（P＜0.05）；单独转染MAGE-A9质粒组，G418抗性的MDA-MB-231细胞克隆数为150.75±9.29，与空载体组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。5MTT法分析结果显示，转染基因后的MDA-MB-231细胞接种96孔板24、48小时，空载体组、单独转染p53质粒组、共同转染p53和MAGE-A9质粒组、单独转染MAGE-A9质粒组MDA-MB-231细胞的相对增殖率分别为135.18%和337.23%、138.27%和228.89%、139.44%和291.51%、142.62%和330.71%。接种24小时后，各组间细胞的相对增殖率差异无统计学意义（P＞0.05）。接种48小时后，单独转染p53质粒组以及共转p53和MAGE-A9质粒组细胞的相对增殖率降低（P＜0.05）；单独转染p53质粒组细胞的相对增殖率明显低于共转p53和MAGE-A9质粒组（P＜0.05）。6在转录水平上MAGE-A9对p53表达影响的分析结果显示，转染空载体组、单独转染0.5g p53质粒组、共同转染0.5g p53和0.5gMAGE-A9质粒组、共同转染0.5g p53和1.0g MAGE-A9质粒组MDA-MB-231细胞中p53与GAPDH条带的灰度值比分别为0.492±0.003、0.723±0.026、0.709±0.014、0.712±0.014。各实验组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。7在翻译水平上MAGE-A9对p53稳定性影响的分析结果显示，转染空载体组、单独转染0.5g p53质粒组、共同转染0.5g p53和0.5gMAGE-A9质粒组、共同转染0.5g p53和1.0g MAGE-A9质粒组MDA-MB-231细胞中p53与GAPDH条带的灰度值比分别为0.747±0.011、0.961±0.027、0.677±0.021、0.607±0.023。各组间的差异具有统计学意义（P＜0.05）。8放线菌酮蛋白合成抑制实验结果显示，单独转染p53质粒组，100g/mL放线菌酮作用0、1、2、4、6小时后， MDA-MB-231细胞中p53与GAPDH蛋白条带的灰度值比分别为0.918±0.014、0.777±0.032、0.607±0.059、0.383±0.032、0.208±0.017；而共同转染p53质粒和MAGE-A9质粒组，100g/mL放线菌酮作用0、1、2、4、6小时后，p53与GAPDH蛋白条带的灰度值比分别为0.890±0.070、0.495±0.039、0.268±0.032、0.165±0.017、0.084±0.018。两实验组中p53蛋白的表达水平在各时间点的差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：黑色素瘤相关抗原MAGE-A9可抑制p53转录活性，降低p53的稳定性，从而影响p53生物学功能的发挥。