健脾软肝方及拆方对CCl<,4>肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响

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探讨健脾软肝方及拆方对CCL<,4>肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响,分析健脾软肝方及拆方抗肝纤维化的作用机理与组方意义。 研究方法: 1.CCL<,4>皮下注射与高脂低蛋白饮食复合因素复制大鼠肝纤维化模型,将实验大鼠随机分成正常组、模型组、鳖甲软肝片组和健脾软肝方组,健脾软肝方按中医病因病机和治法进行拆方,分为健脾活血软肝组、理气活血软肝组、活血软肝组和健脾理气组,共八组。 2.测定大鼠体重、肝脏湿重、脾重并计算肝重/体重以及脾重/体重比值。 3.测定大鼠血清肝功能:赖氏法测定血清谷丙转氨酶(ALT)活性;比色法测定谷草转氨酶(AST)活性;双缩脲法测定总蛋白(TP)含量;溴钾酚绿比色法测定白蛋白(Alb)含量。 4.病理学观察:HE染色观察肝脏脂肪变性、炎症;天狼猩红胶原病理染色观察肝脏纤维化病理形成过程和程度。 5.比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;盐酸水解法测定肝羟脯氨酸(Hyp)含量。 6.实验结果采用SPSS11.0统计软件处理。 结果: 1.正常组大鼠肝脏颜色鲜红,质地柔软,富有弹性,无腹水;模型大鼠肝脏表面呈暗红色,体积缩小,质地稍硬,部分表面呈颗粒状,边缘较钝,其中6只模型大鼠腹腔内均可见到腹水,死亡率为14.14%。 2.与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝重、脾重和肝重/体重以及脾重/体重比指数均显著增加(P<0.01),经药物治疗后,健脾软肝方组脾重及肝脾体比明显下降。 3.与正常组大鼠比较,模型组大鼠血清肝功能明显异常,经药物治疗后,各药物组肝功能均有不同程度的改善,其中,健脾软肝方组和理气活血软肝方组能明显降低ALT含量,健脾活血软肝方组能显著降低AST含量;理气活血软肝方组有明显升高白蛋白的作用。 4.病理学HE染色及天狼猩红染色显示,模型大鼠肝小叶结构被破坏,肝细胞有广泛脂肪变性,大量的纤维增生;肝组织生化Hyp含量明显升高,表现为显著的肝纤维化病理特点。经药物治疗后,各药物组Hyp含量均有程度不等的下降;肝脏质地变软,纤维间隔变窄,肝脂肪变性程度明显减轻,炎性细胞浸润减少,以健脾软肝方组作用最为明显。 5.与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝组织SOD活性明显下降,MDA含量显著升高,表现为显著的脂质过氧化损伤。经药物治疗后,各药物组SOD活性(除理气活血软肝方组、活血软肝方组外)均有不同程度升高,以健脾软肝方组和健脾活血软肝方组在升高SOD活性方面优于其它治疗组;各药物组MDA含量(除活血软肝组外)均有不同程度降低,以健脾软肝方组MDA含量降低较为明显,显示良好的抗肝脂质过氧化作用。 结论: 1.四氯化碳(CCl<,4>)皮下注射与高脂低蛋白饮食复合因素复制大鼠肝纤维化模型,造模6周后,以肝纤维化病理改变为主,该模型存在明显脂质过氧化损伤。 2.健脾软肝方及拆方能显著改善模型大鼠肝功能、减轻肝脏脂肪变性,抑制肝组织胶原过度沉积,促进胶原降解,具有良好的抗肝纤维化作用。 3.健脾软肝方及健脾活血软肝方能显著提高肝组织SOD活性,降低MDA含量,表明抗脂质过氧化是健脾软肝方及拆方抗肝损伤和抗肝纤维化作用的重要靶点之一。 4.健脾软肝方在减少模型大鼠腹水的发生、改善肝功能、降低肝Hyp含量和抗肝脂质过氧化方面较其它拆方显示良好的作用,表咀中医“辨证论治”的指导思想在肝纤维化防治过程中具有重要作用,健脾益气、活血软肝法是治疗肝纤维化的重要方法。
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