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本研究制备了一种能够特异性识别伏马毒素的单克隆抗体,并建立了用于检测伏马毒素B1含量的酶联免疫分析方法,可对玉米样品中伏马毒素B1进行定量检测。通过戊二醛方法将伏马毒素B1(FB1)分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备的FBi-KLH作为免疫原用于免疫Balb/c小鼠,制备的FBi-OVA用作包被原。经过细胞融合与筛选,以及细胞克隆化,得到1G1、1F8、2C4三株能够稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经过单克隆抗体亚型鉴定试剂盒测定,三株细胞所分泌的抗体的重链亚型均为:IgA,轻链亚型均为Kappa。选取特异性最好的细胞株1G1所分泌的单克隆抗体建立了 3种ELISA,分别为:间接竞争ELISA,经过优化的最佳工作条件为:0.1吨/孔包被原(FB1-OVA)、抗体稀释8000倍、HRP-羊抗鼠IgA酶标二抗稀释10000倍、0.5%脱脂乳粉的封闭液、FBi标准品与抗体所用的稀释液均为pH 7.4的PBS缓冲液。方法的灵敏度(IC50)为9.57±0.36μg/L,检测限(IC15)为 2.34±0.031μg/L。直接竞争ELISA,经过优化的最佳工作条件为:抗体包被量为0.1 μg/孔、酶标抗原(FBi-HRP)稀释20000倍、封闭液为0.5%脱脂乳粉、FB1标准品与酶标抗原所用的稀释液均为pH7.4的PBS缓冲液。方法的灵敏度(IC50)为4.39±0.146μg/L,检测限(IC15)为 0.31±0.007μg/L。胶体金增强间接竞争ELISA,将胶体金纳米粒子经巯基十一烷酸(MUA)在其表面修饰羧基后,采用碳化二亚胺法偶联HRP-羊抗鼠IgA酶标二抗,制备胶体金-HRP-羊抗鼠IgA酶标二抗用于ELISA的建立。经过优化的最佳工作条件为:0.01 μg/孔包被原(FB1-OVA)、抗体稀释16000倍、胶体金-HRP-羊抗鼠IgA酶标二抗稀释10000倍、0.5%脱脂乳粉的封闭液、FBi标准品与抗体所用的稀释液均为pH 7.4的PBS缓冲液。方法的灵敏度(IC50)为 0.93±0.0579μg/L,检测限(IC15)为 0.078±0.013μg/L。与传统间接竞争ELISA相比,胶体金增强间接竞争ELISA的灵敏度提高了 10倍左右。此细胞株分泌的单克隆抗体与其他真菌毒素无交叉。用建立的胶体金增强间接竞争ELISA对玉米中的FB1含量进行测定,加标回收率为90.83%-95.83%,变异系数为2.40%-11.42%。并用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)进行验证,二者线性相关系数R2为0.9988,相关性良好,所建立的方法具有较好的准确性。