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高尔基体磷酸蛋白2(GOLPH2，又称GP73，GOLMl)是一种高尔基体II型跨膜糖蛋白。研究表明：GOLPH2的表达具有上皮细胞特异性，在许多上皮组织，如肠，前列腺，气管，胃和胆管上皮细胞中都发现GOLPH2高表达。在正常肝脏的肝细胞中，GOLPH2表达量较低，但在各种原因引起的肝病：包括急慢性肝炎，自身免疫性肝病，慢性HBV/HCV感染，酒精肝等患者中都发现GOLPH2表达升高。此外，GOLPH2表达上调不仅在前列腺癌，精原细胞瘤，畸胎瘤，卵巢癌，肾细胞癌和乳腺癌等癌组织中发现，在Wilson disease引发的肝病和阿尔兹海默病患者中也有发现。各种证据表明GOLPH2可能具有重要的生理功能，但它的功能仍然不明确，本研究的目的是通过筛选与GOLPH2相互作用的蛋白来研究GOLPH2的功能。
人源的GOLPH2蛋白含有401个氨基酸，具有典型的II型跨膜蛋白特征，N端位于胞浆区，C端位于腔面一侧，具有保守的弗林（furin）蛋白酶识别序列R52VRR55，切割后的C端片段从高尔基体经胞内体转运至细胞外。本研究将弗林酶切割位点下游的片段克隆到pGBKT7载体并转入AH109酵母菌株作为诱饵，与预转化人肝细胞eDNA文库的Y187酵母菌株进行杂交，通过营养缺陷培养基筛选与GOLPH2相互作用的蛋白。用三种氨基酸缺陷培养基(TDO+0.25 mM3-AT)筛选到780个阳性克隆，将这些克隆转到四种营养缺陷的培养基(QDO)上，得到184个阳性克隆，进一步经过酶切鉴定，酵母双杂交回复实验，测序和序列比对，最后确定了11个可能与GOLPH2相互作用的蛋白（如表4.1）。其中，在这11个蛋白中，Clusterin作为一个可能与GOLPH2相互作用的可分泌蛋白，在本研究中，我们主要对GOLPH2和Clusterin的相互作用在哺乳动物细胞中通过免疫共沉淀和免疫荧光进行验证。Clusterin是一个与许多生理过程相关的蛋白，在癌症的发生发展过程中起重要作用。Clusterin经过转录，翻译，加工，最终形成两种成熟的蛋白亚型：具有细胞保护功能的sCLU和促进凋亡的nCLU，其翻译过程受到选择性剪切机制的调控。根据Clusterin的亚细胞定位，本研究着重研究GOLPH2与sCLU的相互作用。此外，Dynactin-2与GOLPH2的酸性C末端截短片段的相互作用也在哺乳动物细胞中用免疫共沉淀也得到证实。第三，人血清白蛋白与原核重组表达的GOLPH2的相互作用通过Farwestem得到证实。在此研究中，酵母双杂交初步证实到能与GOLPH2的C.末端片段相互作用的蛋白及其结构域相关信息，为寻找GOLPH2在正常状态及病理状态下的相互作用蛋白以及研究GOLPH2的功能奠定基础。