【摘 要】
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目的 构建人疱疹病毒7型(HHV7)被膜蛋白pp85的原核高效表达克隆,制备用于HHV7感染血清学诊断的基因工程抗原。 方法 ①应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,收获病变细胞
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目的 构建人疱疹病毒7型(HHV7)被膜蛋白pp85的原核高效表达克隆,制备用于HHV7感染血清学诊断的基因工程抗原。 方法 ①应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,收获病变细胞制备粗提细胞抗原,并用Sephadex G-75层析柱初步纯化,获得HHV7细胞工程抗原。②应用PCR技术扩增HHV7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区(328～533氨基酸),目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍-敖合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得基因工程抗原。Western blot检测重组融合蛋白的特异性。③选择最适浓度包被96孔ELISA反应板,选择血清标本进行检测,并与Qiagen公司生产的HHV7 IgM和HHV7 IgG抗体ELISA检测试剂盒进行比较。 结果 HHV7被膜蛋白pp85可在E.coli BL21中高效表达,Western blot检测结果表明该融合蛋白可与12份HHV7特异性IgM阳性血清中的10份(83.3%)、12份HHV7特异性IgG阳性血清中的11份(91.7%)发生反应,而10份阴性的血清均不与之发生反应。基因工程抗原的各项技术指标与Qiagen公司ELISA检测试剂盒有较好的符合率。 结论 HHV7 pp85重组蛋白具有良好的抗原性和特异性,进一步完善后可用于HHV7感染的临床检测,为进一步研制开发新型HHV7诊断试剂提供了重要的理论和实验依据。
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