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缺血性脑血管疾病因其在临床上发病率、死亡率和致残率高而严重威胁着人类的健康。局部脑缺血使部分组织血流下降,导致细胞功能及形态的破坏。目前治疗方法主要是以溶解血栓,恢复缺血脑组织的血液灌流为主。虽然再灌注可以使被阻塞的血管再通,恢复缺血脑组织的血流供应,但客观上又加重了脑组织的功能障碍和结构损伤产生继发性损伤,形成脑缺血再灌注损伤。临床上利用溶栓剂实现血管再通以及患者的自然再灌均可引起脑缺血再灌注损伤,因此研究和探讨缺血再灌注损伤的机制,开发新的脑缺血疾病的预防和治疗药物,能够很好地为人类健康事业做出贡献,也具有广阔的市场前景。 研究目的:通过建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,研究黄芪多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织的保护作用,并对其机制进行探讨。 研究方法:1.确立局灶性脑缺血再灌注损伤模型的具体制作方法。选用体重250-300g SD大鼠40只,随机分为假手术组10只、模型组30只,对模型组大鼠进行神经行为学评分,计算手术死亡率和成功率。制作石蜡切片,进行HE染色,用于组织学观察,并从模型组中随机抽取10只大鼠与假手术组脑含水量测定比较。 2.研究黄芪多糖对局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织含水量、SOD、MDA、梗死体积的影响。SD大鼠随机分A、B两大组,A组用于测定脑组织含水量、SOD、MDA,分假手术Ⅰ组,模型组,黄芪多糖低、中、高剂量组、黄芪注射液对照组,每组18只;B组用于测定梗死体积,分假手术Ⅱ组,模型组,黄芪多糖低、中、高剂量组,每组6只。 3.利用免疫组化方法研究黄芪多糖对局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织TNF-α和IL-1β表达的影响。SD大鼠随机分5组,假手术Ⅱ组、模型组、黄芪低、中、高剂量组,每组6只。制作冰冻切片用于免疫组化实验和普通HE染色,观察组织形态并计算平均积分光密度。 研究结果:1.利用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型手术的成功率大概在80％,死亡率10％,模型组的脑含水量与假手术组明显升高。2.与假手术Ⅰ组比较,模型组脑组织含水量及MDA含量显著升高,梗死率显著增大,SOD值明显降低;与模型组比较,黄芪多糖各剂量组的脑含水量,MDA含量显著降低,SOD值显著增高,梗死率也显著减小。中、高剂量组的作用效果好于黄芪注射液对照组。3.与假手术Ⅱ组相比,模型组的TNF-α和IL-1β表达量(平均积分光密度值)明显增高;与模型组相比,黄芪多糖中、高剂量组的TNF-α和IL-1β表达量明显减少。从HE染色的细胞形态观察,黄芪多糖治疗组较模型组尤其中、高剂量组细胞形态较模型组有明显的改观,核区更加清晰,肿胀减少。 结论:1.本实验室选用SD大鼠体重在250-300g,鱼线直径0.26mm,360mg/kg水合氯醛,颈总动脉进线并永久结扎颈总动脉和颈外动脉,可以获得成功率较高,比较稳定的局灶性脑缺血再灌注损伤模型。2.黄芪多糖可能通过降低脑组织含水量、MDA水平,升高 SOD水平,减少梗死体积,对缺血再灌注损伤的脑组织起一定的保护作用。3.黄芪多糖对缺血再灌注脑损伤的保护作用,可能与其减少脑缺血再灌注时期脑组织TNF-α和IL-1β的表达量有关。