多胺广泛存在于生物体内,在生理pH下,多胺呈高密度的正电荷,能与带有大量负电荷的核酸、蛋白质等生物大分子结合,能够参与基因表达、翻译的调节、细胞增殖和信号的转导、细胞膜的稳定等生理活动过程。多胺与人体健康息息相关,它的主要来源是食物,所以食品中多胺的检测对于人们的健康具有重要的意义,精脒和精胺的含量是常被检测的对象。常用的多胺检测方法是柱前衍生-荧光检测,本文以精脒为例,研究了精脒与常用的几种荧光试剂的衍生反应条件,并选择较佳的实验方案测定了海带、海蜇中的精脒和精胺含量。课题研究的主要内容包括以下四个部分:(1)丹磺酰氯作为柱前衍生试剂与精脒进行反应,考察了衍生剂的用量、缓冲溶液的pH值、衍生温度等因素对衍生反应的影响,确定了最佳反应和HPLC条件:70℃水浴中避光反应反应30 min,使用pH = 10的碳酸钠-碳酸氢钠作为缓冲溶液,甲苯萃取反应液后氮气吹干,甲醇溶解,HPLC流动相使用甲醇:水= 80:20保持3 min,从3 min到14 min,甲醇比率由80%梯度增至100%。此法SPD的工作曲线Y = 0.08136 + 0.3807 X,线性相关系数R = 0.9991,衍生物保留时间的相对标准偏差为0.47%,峰面积的相对标准偏差为1.37%,仪器检出限0.0924 pmol。(2)研究了9-氯甲酸芴甲酯与精脒反应的实验条件并进行了优化,确定了最佳衍生条件:40℃水浴反应10 min,pH = 8的硼酸钠作为缓冲溶液,反应液不需处理,直接进样HPLC分析,甲醇:水= 95:5做流动相。此法工作曲线Y = 1.014 + 21.649X,R = 0.9999,检出限6.60×10-4 pmol。衍生物保留时间的相对标准偏差为0.15%,峰面积的相对标准偏差为1.42%。(3)以邻苯二甲醛-巯基乙醇作为衍生体系进行精脒的衍生反应,pH = 8的硼酸钠作缓冲溶液,室温条件下振摇反应60 s为最佳衍生条件。反应液直接HPLC分析,使用甲醇:水(水、磷酸、三乙胺体积比360:9:6) = 90:10作为流动相,此法工作曲线Y = 0.5260 + 1.1314X,R = 0.9966,检出限0.0143 pmol。但衍生产物不稳定,重复进样分析差别很大。(4)建立了柱前衍生测定海带、海蜇样品中精脒和精胺含量的方法,用5%高氯酸提取样品中多胺,分别以FMOC-Cl和DNS-Cl衍生,两种方法测得的结果基本一致,另外加标回收率的实验结果表明,前者比后者效果好。