虾夷扇贝LITAF基因的克隆及表达分析

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虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)是一种重要的经济贝类,分布于日本北部沿海、朝鲜半岛北部和俄罗斯库页岛海域等地。1982年从日本将该种引进到我国并进行人工繁殖和养殖技术的研究,目前虾夷扇贝已经成为我国北方重要的贝类养殖品种。近年来,虾夷扇贝在养殖过程中出现发病率高、死亡率不断上升的现象,这给养殖业带来了巨大的经济损失。因此开展虾夷扇贝抗病及免疫相关基因的研究有助于控制疾病的爆发,更好发展贝类养殖业。脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(LITAF)是一类炎症细胞因子,在先天性免疫系统中发挥重要的介质作用。本研究根据虾夷扇贝LITAF基因的EST序列,应用RACE技术克隆了虾夷扇贝LITAF基因全长cDNA序列(GenBank收录号:JF708046)。LITAF基因cDNA全长1551bp,5’非编码区76bp,3’非编码区1001bp,包含4个mRNA末端不稳定信号(ATTTA)和两个加尾信号(AATAAA)。开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸,氨基酸序列中存在一个保守的LITAF结构域,理论分子量16.99kDa,等电点为6.24。LITAF基因序列为3698bp,由3个外显子和2个内含子组成。多序列比对结果显示,虾夷扇贝LITAF基因的氨基酸序列与其它已知物种的LITAF基因氨基酸序列具有较高的相似性,说明虾夷扇贝LITAF基因是LITAF家族的一员。利用实时荧光定量PCR技术分析LITAF基因在虾夷扇贝不同组织、不同胚胎发育阶段以及鳗弧菌(Vibrillo anguillarum)刺激后各时间段的表达情况。结果发现LITAF基因在所检测的6个成体组织中均有表达,其中肾脏的表达量最高,胚胎发育的7个时期中,担轮幼体时期表达量最高,菌刺激36h实验组与对照组的表达量差异大。这些结果表明LITAF基因参与了虾夷扇贝的先天性免疫应答,为进一步了解虾夷扇贝的免疫防御机制提供了参考。
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