【摘 要】
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目的:探讨核转运蛋白(karyopherinα2,KPNA2)对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)增殖和血管生成的影响,并从分子层面分析其可能的作用机制。方法:(1)构建Sh-KPNA2慢病毒载体及空载
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目的:探讨核转运蛋白(karyopherinα2,KPNA2)对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)增殖和血管生成的影响,并从分子层面分析其可能的作用机制。方法:(1)构建Sh-KPNA2慢病毒载体及空载体Sh-Control转染Saos-2细胞,观察敲除KPNA2后对Saos-2细胞增殖的影响,用生长曲线反应KPNA2对Saos-2细胞的影响;(2)利用转染Sh-KPNA2和空载体Sh-Control的Saos-2细胞分别构建OS动物模型,待裸鼠成瘤后比较两组裸鼠瘤体的重量和体积;(3)裸鼠处死前,用小动物活体荧光分子断层成像系统(FMT)和瘤体的免疫组化验证KPNA2对瘤体血管生成的影响;(4)qRT-PCR和Western-bolt验证瘤体内KPNA2和睾丸决定因子Y染色体性别决定区基因(SRY related HMG box-2,Sox2)的mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)Sh-KPNA2组细胞增殖能力较Sh-Control组明显降低(P<0.05);(2)Sh-KPNA2组荷瘤小鼠瘤体体积和重量均小于Sh-Control组(P<0.05);FMT扫描结果显示Sh-Control组的血管生成能力高于Sh-KPNA2组(P<0.05);Sh-Control组的Pecam-1表达量明显高于Sh-KPNA2组;(3)瘤体qRT-PCR和Western-blot结果均显示Sox2在Sh-Control中表达高于Sh-KPNA2。结论:(1)KPNA2对骨肉瘤的发生发展起着至关重要的作用。(2)敲除KPNA2可抑制OS增殖从而对OS的发展起到抑制作用。(3)KPNA2可以促进OS血管生成,从而促进其早期转移。(4)KPNA2在骨肉瘤内的表达与Sox2密切相关,敲除KPNA2后,Sox2的表达明显降低,而Sox2是骨肉瘤的干细胞干性相关因子,故而其可能与骨肉瘤的干细胞干性息息相关。
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