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猫的免疫缺陷病毒(FIV)广泛分布于猫科动物种群,它是全球猫科动物的主要病原体,血清阳性率高达26%。它在几种濒危猫科动物中很普遍。FIV在猫中引起后天免疫机能丧失综合症(艾滋病)[1,2]。基于env基因的V3-V4区域的遗传多样性,将家养猫中循环的FIV分离株在全球分成五个特征明确的菌株(A,B,C,D和E)[3-5]。 猫科动物免疫缺陷病毒(FIV)于1987年首次在加利福尼亚的一只猫中被分离出来后被记录下来,被认为是全世界猫的常见逆转录病毒病原体。FIV属于逆转录病毒家族。它与猫的白血病病毒属于同一家族,但属于另一个慢病毒亚家族[6]。 猫的免疫缺陷病毒的基因组是单链线性RNA,猫的免疫缺陷病毒的基因组RNA包含三种主要的开放阅读框架:gag,pol,env[7]。gag基因是不同菌株的保守序列,它位于5末端,编码由底物蛋白前体、衣壳和核衣壳组成的多蛋白前体[8,9]。 FIV感染后,出现疾病症状,根据这些症状可用于初步诊断。但是,大多数受感染的猫在整个生命中仍然无症状,尽管存在持续的慢性感染[10]。最终诊断基于病毒分离和抗体测试。从外周血淋巴细胞中分离FIV是一种可靠且清晰的诊断测试,但是这种测试对于日常使用来说太复杂、昂贵且不切实际。而且最近FIV诊断的问题之一是兽医不能依靠抗体作为接种猫感染状况的指标。一种替代FIV感染血清学诊断的方法是PCR检测,这是一种灵敏的特异性检测方法,用于鉴定整合到感染细胞基因组中的原病毒DNA[11]。 实时PCR是标准PCR技术的变体,通常用于量化样品中的DNA或RNA。使用特定的引物,可以确定特定DNA或RNA序列的拷贝数。通过测量PCR循环中每个阶段扩增产物的量,可以确定数量[11,12]。在这项研究中,我们使用实时PCR方法,以gag基因为目标,检测从猫血液中分离出的猫的免疫缺陷病毒基因。 目的:开发检测猫免疫缺陷病毒的PCR检测系统。 为了实现这一目标,确定以下任务: 1.对文献数据进行分析,确定基因组的保守区域,该区域被选作扩增目标。从文献来源中选择几对引物; 2.优化所选引物的序列或为gag基因的最保守部分指定其他引物; 3.选择一对能够确定更多真正阳性样本的引物; 从111只猫的血液中分离DNA,并使用选定的引物确定阳性样本。