神经病理性疼痛大鼠脊髓APC-Cdh1的表达变化

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目的建立大鼠神经病理性疼痛模型并检测大鼠脊髓APC-Cdh1的表达情况,从而探讨其在神经病理性疼痛中枢敏化中的作用,为神经病理性疼痛的治疗提供新的方向。方法成年雄性SD大鼠54只,体重180-220g,随机分为手术组(SNL组)、假手术组(Sham组)、空白组(Na ve组),每组18只。SNL组沿L4-S1脊柱中线作一纵行切口,切除L5-L6关节突关节和L6横突,游离L5神经周围组织,在其远端紧紧结扎并剪断。Sham组除了不结扎剪断L5神经外,其余均同SNL组。Na ve组则不作任何处理。于术前3、1天,术后2、3、4、5、6、7天各时间点用von Frey细丝测定大鼠左后足50%机械刺激缩足阈值。于术后第7天测定完机械痛阈后,将各组大鼠处死,取脊髓腰膨大。每组取6只采用链霉亲和素-生物素复合物(strept avidin-biotincomplex,SABC)法检测脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表达;每组取6只大鼠采用实时荧光定量PCR检测脊髓内Cdh1的mRNA含量;每组取6只大鼠采用Wstern blot检测脊髓内Cdh1及其相关蛋白的表达量。结果1.大鼠50%机械刺激缩足阈值变化:三组大鼠手术前基础50%机械刺激缩足阈值无统计学差异(P>0.05)。SNL组大鼠左后足50%机械刺激缩足阈值于术后第二天即开始显著下降(P<0.05),一直持续到术后第七天,而Sham组和Na ve组大鼠的50%机械刺激缩足阈值则没有明显的变化。2. SABC法检测脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表达:术后第7天免疫组织化学显示SNL组大鼠左侧脊髓背角的GFAP和c-Fos蛋白表达含量明显增高,与Sham组和Na ve组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.实时荧光定量PCR检测Cdh1的mRNA表达:与Sham组与Na ve组相比,SNL组大鼠于术后第7天脊髓腰膨大内Cdh1mRNA的含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4. Western blot检测Cdh1以及Cdh1相关蛋白APC2、Skp2的表达水平:与Sham组和Na ve组相比,术后第7天SNL组大鼠脊髓腰膨大内Cdh1的表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);而各组间APC2和Skp2的差异无统计学意义(P>0.05)。结论将大鼠L5神经结扎并剪断,可以成功地制备神经病理性疼痛模型,并能诱导脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表达。神经病理性疼痛模型大鼠脊髓腰膨大Cdh1的表达下调,提示APC-Cdh1参与了神经病理性疼痛的形成过程,而其相关蛋白APC2和Skp2则可能并未参与该过程。
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