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本研究发展了一种新的标记用酶和一种蛋白激酶检测的新方法。在新标记用酶的研究中,本实验室之前从有机磷农药高效降解菌Pseudomonas sp.WBC-3中分离出来了一种具有高活性的甲基对硫磷水解酶(MPH),可以催化甲基对硫磷水解,生成黄色的产物对硝基酚,该产物在405 nm处有特异的吸收峰。通过对该MPH性质的研究,包括MPH的分子量、在溶液中的状态、热稳定性、保存稳定性、催化反应速度等进行的详细分析,证明了MPH具有发展成为一种新标记用酶的潜力。为进一步验证MPH作为一种新标记用酶的可行性,我们通过基因融合构建了MPH和对虾白斑综合症病毒特异性识别单链抗体(scFv A1E)的融合蛋白(MPH-L-A1E),并将其成功地用于对虾白斑综合症病毒(WSSV)的检测中。在蛋白激酶检测新方法的研究中,针对抗体法在蛋白激酶检测中的缺点,开发了一种通用的磷酸化短肽(或蛋白)识别元件:Fe3+-NTA修饰的芯片。通过对实验中所选择的具有不同磷酸化模式的短肽和相应的非磷酸化的短肽来模拟不同激酶的产物和底物的检测,评价Fe3+-NTA芯片特异性捕获磷酸化短肽的能力,证明了Fe3+-NTA芯片具有良好的捕获磷酸化短肽的能力,同时确定了每种磷酸化短肽的检测极限,检测范围从纳摩尔到微摩尔级。同时本研究也选择了三种商业化的蛋白激酶,包括糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase3β,GSK3β),表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent Kinase,CDK),进行体外激酶反应,利用这种方法评价了三种激酶的活性。