小麦光腥黑粉菌侵染小麦花药的转录组差异表达分析及小麦体内生理响应的初探

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小麦光腥黑粉菌(Tilletia foetida(Wallr.)Liro)侵染小麦后导致的小麦光腥黑穗病是一种严重危及小麦产量和面粉品质的世界性病害。目前,对于小麦光腥黑粉菌侵染小麦的分子机制尚未完全清楚,而关于寄主小麦对该病菌的防御机制报道也较少。本研究以进一步探究小麦光腥黑粉菌侵染小麦花药的分子机理为目的,通过RNA-seq技术,对小麦光腥黑粉菌侵染小麦花药的五个发育时期进行转录组测序分析,系统地研究了不同花药发育阶段响应真菌侵染的基因表达水平及相关代谢通路的变化,同时在生理层面上,为明确小麦光腥黑粉菌侵染小麦后小麦茎、叶、穗部防御酶活性的变化,选用感病品种‘东选3号’和抗病品种‘伊农18/兰考矮早8号’为供试材料,测定了小麦被小麦光腥黑粉菌侵染0~6d后,小麦体内的过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧歧化物酶(SOD)的活性,获得的主要研究结果如下:1.转录组测序共得到了61048个显著差异性基因,各样品clean data均达到9.91 Gb以上,与参考基因组的平均比对率为79.22%,对差异表达基因进行GO富集分析,差异基因富集到最多的条目为:代谢过程、细胞过程、细胞部分、细胞器、膜部分、结合、催化活性。2.通过KEGG代谢通路富集分析,差异表达基因显著富集的代谢通路有15条,其中最为显著富集的是:内质网中的蛋白质加工、植物与病原菌互作、苯丙烷生物合成、植物激素信号传导途径。通过对苯丙烷生物合成、植物激素信号传导途径进一步分析,发现被侵染花药发育早期多数差异基因显著上调表达,而至发育后期时,多数为显著下调表达。从差异表达基因中共鉴定了7类转录因子,含有最多差异表达基因的转录因子家族依次为:MYB、b HLH、WRKY、b ZIP、MADs-box、SPL、AP2/ERF,其中多数转录因子都参与了植物与病原物互作和信号转导途径。3.对小麦光腥黑粉菌侵染感抗两品种的小麦进行防御酶的测定,发现两个小麦品种的防御酶活性均显著升高,除感病品种叶片CAT活性的升高幅度高于抗病品种外,抗病品种小麦茎和穗部POD和SOD活性均高于感病品种,且抗病品种的酶活性持续时间长,变化幅度较平缓。接菌后两个品种叶片的防御酶活性均高于茎和穗部,而穗部的CAT和POD活性出现酶活性高峰的时间最早,说明三种防御酶均与小麦抗病性有一定的相关性。
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