利用电穿孔提高抗肿瘤药物疗效的研究

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细胞膜是电场作用的关键靶位点,它由液晶态和晶态两种状态的磷脂双分子层构成,具有一定的流动性和通透性。细胞膜对于一些小的分子是自由通过的,对大分子物质等则具有选择性,形成通透性屏障。细胞膜受到高强度脉冲电场处理时,其通透性障碍受到抑制,电穿孔就是形成短暂的通透性结构或膜上形成微孔。这种微孔能维持20多毫秒,最后因膜的流动性而闭合。不同的生物材料用相同的电场处理,穿孔的几率不同;同样,相同的生物材料用不同的电场处理,穿孔的几率也不同。本实验用天津理工学院生厂的基因脉冲导入仪处理Hela细胞,在不同的电场参数(电压,电容,脉冲次数)处理下,电穿孔的几率不同,从实验中找到了穿孔的最佳条件,在扫描电镜下观察到了电穿孔,电穿孔的深度与电压有关。Hela细胞受到电场处理时,表面的微绒毛受到不同程度的损伤。 利用电穿孔把抗肿瘤药物(环磷酰胺)导人Hela细胞,经台盼蓝染色和细胞流式仪测定,细胞的存活率大大降低,凋亡和死亡率大大增加,在小剂量时就能达到很大的胞质毒性。运用丫啶染色可以看到典型的凋亡细胞,核固缩、断裂。还发现,当药物达到一定的浓度时,电化学处理细胞的存活率与药物的浓度无关,即低剂量组与高剂量组的细胞存活率相等;在相同的药物浓度范围内,化疗组的细胞存活率明显与浓度有关;只用电场处理的细胞存活率与对照组相比发现,电场使细胞的存活率降低。 将电穿孔与环磷酰胺结合用于治疗KM小鼠S180肉瘤细胞异种移植肿瘤,电化学组的治愈率和有反应的比例都比只用电场和只用环磷酰胺(化疗)及对照组高。用电场处理肿瘤后,肿瘤部位不同程度的发生水肿,但随后水肿消失,表面结痂,肿瘤体积缩小直至消失。剥离未完全消退的电化学处理肿瘤与对照组肿瘤,比较发现,前者的表面几乎没有血管分布,对照组的血管非常丰富。
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