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本研究采用农杆菌介导法将反义蜡质基因(Waxy基因)导入杂交稻亲本,并对转化效率的影响因素进行了探讨。主要结论如下: 幼胚和幼穗是较好的愈伤组织诱导材料,但受取材时间的限制,成熟胚作为水稻遗传转化的初始培养材料具有离体再生频率高、再生周期短、再生植株育性好、取材方便等优点,其培养力相对较差的缺陷可以通过在培养基中适当加入某些外源生长物质等来弥补。 利用携带反义蜡质基因和潮霉素抗性基因的双元载体p13w4质粒对粳型稻广粳1号和籼型稻特青进行遗传转化。同时,利用分别携带反义蜡质基因的p13w8质粒和含抗潮霉素抗性基因的p1300质粒对籼稻品种进行了共转化研究。经PCR检测证明,两种转化方式都获得了外源基因整合进染色体组的转基因水稻植株。对转基因植株后代进行栽培,大多数T0代和T1代都能正常结实。PCR检测表明,T1群体中目的基因与标记基因已发生了分离,其中,从采用共转化方式获得的转基因植株后代中获得了仅含目的基因而不含抗性标记基因的转基因植株。 水稻遗传转化过程中,内源激素的含量及变化影响着愈伤组织的生理状态。IAA主要存在于种胚诱导出的愈伤组织上及芽中,且过高的IAA含量不利于愈伤组织的诱导和生长;GA通过与IAA的互作效应来调控愈伤组织的生长状态,较高的IAA、GA含量能够促进愈伤组织细胞的生长与增殖,较低时有利于愈伤组织的分化;Z主要存在于种胚中,对愈伤组织诱导的启动有决定性作用,如果外植体中的Z含量太低,即使有较高的IAA和GA含量也不能诱导出愈伤组织;过高的ABA对愈伤组织的诱导不利,但在继代培养时适量升高ABA含量有利于胚性愈伤组织的形成。 通过对转基因植株T1收获的种子进行直链淀粉含量检测表明,其直链淀粉含量相对于对照下降了1~61%。有些单株的直链淀粉含量已降至10%以下,远低于对照(其直链淀粉含量为22.0%)。