基于微流控芯片的成肌细胞对缺氧损伤心肌细胞的修复研究

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心肌梗塞(MI)是全球死亡率和患病率稳步增长的主要原因。除了原位心脏的移植外目前还没有特别有效的治疗方法,而心脏移植由于供体数量的有限,只能为一小部分的患者提供。通过移植各种类型的干细胞、或者激活原心肌细胞的再生能力将损失的心肌细胞替换来治疗心肌梗塞被寄予相当大的希望。在本研究中,我们设计了一个集成的微流控装置,可以模仿体内骨骼肌成肌细胞移植作为冠状动脉旁路移植术(CABG)的辅助治疗来修复缺氧损伤后的心肌细胞。本研究设计的微流控芯片由5个相同的结构单元构成,每个结构单元都可以同时培养大鼠心肌H9c2细胞和大鼠骨骼肌成肌细胞L6。利用微管道及微阀门的控制,心肌细胞和成肌细胞在单独的细胞培养腔,接种12小时后,两种细胞贴壁和增值都表现的非常积极,用AO/PI双染色法对培养腔的细胞进行活力鉴定,心肌细胞活力为99.5%,成肌细胞为99.1%。通过芯片外用MTT法和AO/PI活力检测法对FCCP作用于心肌细胞的浓度和时间进行了探索和选择,最终用FCCP (30μmol/L)被用来构建芯片中的缺氧损伤。FCCP (30μmol/L)作用于中间培养腔的心肌细胞30min,成功建立了心肌细胞的缺氧损伤模型。此时将控制阀门打开,成肌细胞与心肌细胞的液流相通,成肌细胞向缺氧损伤心肌细胞迁移的同时,也为缺氧损伤的心肌细胞提供营养物质。12h后两种细胞即可接触共培养,30小时后缺氧损伤的心肌细胞在细胞面积、圆度、肌动蛋白及细胞核、线粒体膜电位这几方面都有了明显的修复变化。该研究为微流控芯片在MI研究中的应用奠定理论基础,并为急性心肌梗塞(AMI)发生及治疗机理的研究提供新思路。
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