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目的1.观察再灌注期心肌Zip2的表达是否增加,并探讨再灌注时Zip2表达上调是否因锌含量减少所引起。2.阐明Zip2在心肌缺血/再灌注损伤中的作用。3.探讨再灌注时锌离子的丢失是否通过激活STAT3来增加Zip2的表达。方法建立小鼠在体心脏缺血/再灌注模型和H9c2细胞缺氧/复氧模型;用电感耦合离子发射光谱仪（ICPOES）测量心脏组织的锌含量;用实时定量PCR技术（RT-PCR）检测心肌组织中Zip2 mRNA表达水平;用Western blotting法检测心肌组织与H9c2细胞中Zip2、p-STAT3（Tyr705）、STAT3及Tubulin的蛋白表达;利用CCK-8法检测H9c2细胞活性;利用LDH、cTn I、CK-MB ELISA试剂盒检测小鼠血清中酶的活性;用Evans Blue和TTC双染色法检测心肌梗死面积大小。结果1.ICPOES实验结果显示,再灌注时心肌锌离子含量减少,说明再灌注引起锌离子丢失。2.RT-PCR和Western blotting实验结果显示,再灌注时Zip2的mRNA和蛋白表达均增加,而再灌注初期给予ZnCl2能够抑制Zip2的表达,提示再灌注时锌离子的丢失引起Zip2表达上调。3.与野生型小鼠相比,Zip2基因敲除鼠的心肌梗死面积增大,血清中的LDH、cTn I及CK-MB水平升高,表明Zip2基因敲除加重了心肌缺血/再灌注损伤;而在体转染Zip2后,与Vector组相比,Zip2过表达组心肌梗死面积明显减小,血清中的LDH,cTn I及CK-MB的水平降低,提示Zip2过表达明显减轻了心肌缺血/再灌注损伤。4.在H9c2细胞缺氧/复氧模型中,与NC组相比,Zip2 siRNA转染组的细胞存活率明显降低,表明Zip2基因敲降加重了缺氧/复氧损伤;而外源性ZnCl2逆转了Zip2 siRNA引起的心肌损伤,增加了细胞存活率。与此相反,Zip2的过表达明显增加了细胞的存活率,表明Zip2过表达可减轻缺氧/复氧损伤,而外源性给予锌离子螯合剂TPEN后则抑制了Zip2过表达诱导的心肌保护作用。这些结果提示,Zip2通过维持细胞锌稳态而发挥其抗心肌缺血/再灌注损伤保护作用。5.与对照组相比,缺血/再灌注组STAT3（Tyr705）磷酸化水平显著增高;而再灌注初期给予ZnCl2则能够抑制这一效果,STAT3（Tyr705）磷酸化水平显著下降。这些结果表明,再灌注期锌离子丢失诱导STAT3的激活。6.RT-PCR和Western blotting的实验结果显示,与缺血/再灌注组相比,STAT3的抑制剂stattic明显抑制了再灌注期Zip2表达升高并抑制了STAT3（Tyr705）的磷酸化。这些结果提示,再灌注时STAT3（Tyr705）的激活介导Zip2的表达上调,是Zip2的上游信号蛋白。7.与Vector组相比,在体转染STAT3 AAV组的STAT3（Tyr705）磷酸化水平和Zip2表达显著增加,而STAT3显性负突变体（STAT3 Y705F）则显著抑制了STAT3（Tyr705）磷酸化水平,Zip2表达也同样被抑制,进一步证明STAT3作为Zip2的上游信号介导Zip2的表达上调。8.与Vector组相比,STAT3 AAV组明显降低了心肌梗死面积和小鼠血清中LDH,cTn I及CK-MB的水平,而STAT3 Y705F则抑制了这一保护作用,导致心肌梗死面积增大和小鼠血清中LDH、cTn I及CK-MB水平的升高。此外,在Zip2-KO小鼠,在体转染STAT3未能减少心肌梗死面积和小鼠血清中的LDH、cTnI、CK-MB的水平,表明Zip2基因敲除抑制了STAT3过表达诱导的心肌保护作用,STAT3通过Zip2保护再灌注心脏。结论1.再灌注期锌离子的丢失诱导Zip2的表达上调。2.Zip2通过维持再灌注期锌离子的稳态来发挥其心肌保护作用。再灌注期Zip2表达增加是心肌细胞对抗缺血/再灌注损伤的内源性保护机制之一。3.再灌注期心肌锌离子丢失通过激活STAT3来上调Zip2表达,STAT3通过Zip2发挥其心肌保护作用。