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目的:本研究为了解肺腺癌细胞 P15的一些凋亡相关基因的甲基化情况,研究去甲基化药物地西他滨(decitabine,DAC)对这些凋亡相关基因的去甲基化效果,探讨使用DAC处理后,顺铂(cisplatin,CDDP)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)化疗效果是否增强。 方法:通过平板克隆实验、生长曲线实验观察 P15细胞的生物学性状变化,测定单独使用地西他滨,顺铂,以及两药联合使用时对细胞的平板克隆形成和生长抑制情况的影响。TUN E L实验检测单独使用地西他滨,顺铂,以及两药联合使用时药物作用前后肺腺癌细胞P15的凋亡变化。通过甲基化特异性PCR(Methylation-Special PCR,MSP)法,分别设计基因的甲基化引物和非甲基化引物检测地西他滨作用于肺腺癌细胞P15前后的p73、p14ARF、p16INK4a、bax甲基化情况,并通过RT-PCR法检测地西他滨作用于肺腺癌细胞P15前后p73、bcl-xL、BAD、bax、p14ARF、p16INK4a的mRNA表达变化情况。 结果:平板克隆实验、生长曲线实验的结果表明,地西他滨、顺铂联合使用时 P15细胞的平板克隆形成数量明显降低,细胞的生长抑制率明显增加。TUNEL实验表明,地西他滨、顺铂联合使用时,细胞的凋亡数量显著增加,甲基化特异性PCR检测发现地西他滨处理后能对 p73、p16INK4a、bax产生去甲基化效果,不能对 p14ARF产生去甲基化效果。用RT-PCR检测发现地西他滨处理后 p73、BAD、bax、p16INK4a的mRNA表达有所增加。bcl-xL、p14ARF的mRNA表达未见增加。 结论:1.肺腺癌细胞中存在一些凋亡相关基因由于甲基化的改变而沉默,并且会影响顺铂等化疗药物的敏感性。2.体外研究证实,地西他滨具有去甲基化效果,并且会增强顺铂对肺腺癌细胞P15的化疗效果。