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目的通过构建SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derivedmesenchymal stem cells, BMSCs)与大鼠来源C6脑胶质瘤细胞直接共培养模型，探讨BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接共培养后BMSCs是否发生瘤样转化；通过构建BMSCs原位注射C6脑胶质瘤荷瘤裸鼠模型，为BMSCs在C6脑胶质瘤活体内瘤样转化的研究提供基础模型，从而为BMSCs作为靶向治疗载体安全用于临床提供实验依据。材料与方法1.实验动物SPF级SD大鼠，3-4周龄，体重约40-60g；裸鼠，雌性，5-6周龄，体重约18-20g，均购于重庆医科大学实验动物中心。2.细胞来源全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs；C6脑胶质瘤细胞系和293细胞系均由重庆医科大学附属儿童医院“儿童发育与疾病研究教育部重点实验室”肿瘤研究室惠赠；3.实验分组本研究分为两部分，第一部分分为三组：(1)实验组：细胞膜荧光染料CM-Dil标记的BMSCs(CM-Dil+BMSCs)与C6脑胶质瘤细胞直接共培养；(2)阳性对照组：C6脑胶质瘤细胞单独培养；(3)阴性对照组：BMSCs单独培养。第二部分分为两组：(1)实验组：原位注射绿色荧光蛋白基因重组腺病毒载体(Ad-GFP)标记BMSCs (Ad-GFP+BMSCs)的C6脑胶质瘤荷瘤裸鼠；(2)阳性对照组：未注射Ad-GFP+BMSCs的荷瘤裸鼠。4.实验方法4.1全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs，倒置显微镜观察细胞形态。4.2免疫荧光（Immunoflurescence, IF）法检测CD90、CD105、CD45、GFAP蛋白表达情况。4.3流式细胞术（Flow cytometry, FCM）检测感染效率、分选直接共培养组BMSCs。4.4RT-PCR检测各组GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1、CD90、CD105基因的表达水平。4.5HE染色法观察肿瘤组织细胞形态结构。结果1. BMSCs培养至第三代时，细胞形态、性质均一。IF结果显示90%以上BMSCs表达CD90分子、CD105分子，不表达CD45分子。BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接共培养7d后，BMSCs表达酸性胶质纤维蛋白（Glial fibrillary acidic protein, GFAP）水平较阴性对照组明显增高；BMSCs表面阳性分子CD90、CD105表达较阴性对照组明显减弱。2. FCM结果显示CM-Dil标记BMSCs标记效率为98.3%；Ad-GFP感染BMSCs72h后感染病毒量0ul、5ul、6ul、8ul、10ul、15ul组感染效率分别为0.22%、8.58%、29.03%、36.54%、42.27%、51.43%。3. RT-PCR结果显示BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接共培养7d后，BMSCs表达GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1基因水平较阴性对照组明显增高（P＜0.05）；BMSCs表达CD90、CD105基因水平较阴性对照组明显降低（P＜0.05）。4. HE染色结合激光共聚焦结果显示BMSCs原位注射到荷瘤裸鼠瘤体7d后，BMSCs仍存活，通过Ad-GFP绿色荧光信号对瘤体内的BMSCs进行定位。结论1. BMSCs在与C6脑胶质瘤细胞直接共培养后，其表面分子发生了改变且肿瘤相关基因表达增高，提示BMSCs在C6脑胶质瘤细胞微环境中存在瘤样转化倾向。2. Ad-GFP标记的BMSCs原位注射到C6脑胶质瘤瘤体中可以存活并通过荧光标记进行定位，可以做为BMSCs在C6脑胶质瘤活体内瘤样转化研究的基础模型。