ClC-3氯通道属于ClC氯通道家族，在哺乳动物的组织和细胞广泛表达，其中高表达于中枢神经系统、肾脏和肠道。在中枢神经系统，ClC-3主要分布于嗅球、海马及小脑。在神经突触的囊泡上亦有ClC-3分布。近年来，在胰脏、心脏、肝脏、脾脏、。肾脏、肠道、气管及血管平滑肌、脑内皮细胞、无色素睫状上皮细胞、T淋巴细胞上均检测到ClC-3蛋白的表达。本室的研究表明，ClC-3氯通道受细胞容积变化所调控，是A10血管平滑肌容积调节性氯通道的分子基础。大量资料表明，容积调节性氯通道不仅参与细胞容积的调节，在细胞的增殖、分化和凋亡以及维持膜电位和胞内酸碱平衡等过程中亦起重要作用。 第二部分siRNA沉默ClC-3蛋白后对A10血管平滑肌细胞Ca<2+>运动的影响本部分实验采用Fura-2荧光探针测定胞浆Ca<2+>浓度技术，观察了C1C-3 siRNA寡核酐酸转染后对A10细胞基础Ca<2+>水平、ROCC的激动剂OAG引起的Ca<2+>内流以及α1-肾上腺素受体激动剂苯肾上腺素(Phe)和Ca<2+>池Ca<2+>泵抑制剂TG引起的Ca<2+>外释放和Ca<2+>内流的影响，采用Fura-2荧光的Mn<2+>淬灭实验技术观察了小分子RNA沉默C1C-3蛋白后对ROCC的激动剂OAG以及α1-肾上腺素受体激动剂苯肾上腺素(Phe)和Ca<2+>池Ca<2+>泵抑制剂TG引起的Mn<2+>淬灭的影响。拟探讨C1C-3氯通道在AIO细胞Ca<2+>调控中的作用。结果表明： 1 Western blot结果显示，C1C-3siRNA寡核苷酸40nM、80nM、160nM转染48小时，可浓度依赖性抑制A10细胞内源性ClC-3蛋白的表达，其抑制率分别为39.43±5.3﹪，56.3±6.1﹪和55.0±6.5﹪(n=4)，其中80nM达到最大抑制作用。而转染negative和lipofect-RNAMAX对AIO细胞CIC-3蛋白的表达无影响。以下都是选用CIC-3 siRNA寡核苷酸80nM转染A10细胞48小时后进行实验的。 2 siRNA沉默后的A10细胞胞浆基础Ca<2+>浓度为31.2±3.7nmol.L<-1>(n=18)，明显低于未转染对照组的62±5.5 nmol.L<-1>(P<0.01，n=18)。而转染negative和1ipofect-RNAMAX的基础Ca<2+>水平分别为67.3±2.0 nmol.L<-1>(n=6)和66.2±3.0nmol.L<-14>(n=6)，与对照组相比无差异。 3 在1μmol.L<-1> nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞，100μmol.OAG引起的Ca<2+>净内流量为115.6±3.5 nmol.L<-1>(n=6)，低于未干扰对照组的Ca<2+>内流198.7±3.3 nmol.L<-1>(n=6，P<0.01 vs ClC-3 siRNA转染组)，两者间有显著性差异。而转染negative和lipofect-RNAMAX转染组Ca<2+>内流分别为204.8±4.1和200.7±5.3 nmol.L<-1>(n=6)，与未转染对照组相比均无差异。 4 在1 μ mol.L<-1>nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞，1μmol.L<-1>TG引起的Ca<2+>释放为30.3±2.2 nmol.L<-1>(n=6)，与未转染的对照组Ca<2+>释放27.3±3.3 nmol.L<-1>(n=6)没有显著性差异，Ca<2+>内流为134.3±4.5 nmol.L<-1>(n=6)，显著低于未转染的对照组Ca<2+>内流266.0±10.0 nmol.L<,-1>(n=6，P<0.01 vs C1C-3 siRNA转染组)。而转染negative和lipofect-RNAMAX转染组的Ca<2+>释放分别为25.9±2.4(n=6)和28.7±4.1nmol.L<-1>(n=6)，Ca<2+>内流分别为270.0±9.7(n=6)和274.4±12.0nmol.L<-1>(n=6)，与未转染对照组相比均无差异。 5 在1μmol.L<-1>nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞，10 μmol.L<-1> Phe引起的Ca<2+>释放为33.1±3.3 nmol.L<-1>(n=6)，与对照组的Ca<2+>释放30.0±2.1 nmol.L<-1>(n=6)没有显著性差异，Ca<2+>内流为104.3±3.2nmol.L<-1>(n=6)，显著低于未转染的对照组Ca<2+>内流294.9±6.7 nmol.L<-1>(n=6，P<0.01 vs CIC-3 siRNA转染组)，两者间有显著性差异。而转染negative和lipofect-RNAMAX转染组的Ca<2+>释放分别为29.7±2.0(n=6)和30.7±2.9nmol.L<-1>(n=6)，Ca<2+>内流分别为290.8±3.9(n=6)和299.0±4.1 nmol.L<-1>(n=6)，与未转染对照组相比均无差异。 6 在1 μ mol.L<-1>nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500 μM Mn<2+>均可引起一个缓慢而微弱的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为9.4±0.5﹪和12.2±1.0﹪(n=6)，两者之间没有显著性差异。用100μmol.L<-1>OAG激活受体操纵性阳离子通道后，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500μMMn<2+>均可引起一个明显的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为16.3±1.9﹪和30.2±2.2﹪(n=6，P<0.01)，两者之间有显著性差异。 7 在1μ mol.L<-1>nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500μM Mn<2+>均可引起一个缓慢而微弱的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为9.4±0.5﹪和12.2±1.0﹪(n=6)，两者之间没有显著性差异。用1μ mol.L<-1>TG激活受体操纵性阳离子通道后，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500 μMMn<2+>均可引起一个明显的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为16.6±3.5﹪和33.2±3.5﹪(n=6，P(0.01)，两者之间有显著性差异。 8 在1μ mol.L<-1>nifedipine存在的条件下，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500μMMn<2+>均可引起一个缓慢而微弱的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为9.4±0.5﹪和12.2±1.0﹪(n=6)，两者之间没有显著性差异。用10 μ mol.L<-1>Phe激活受体操纵性阳离子通道后，在siRNA沉默后的A10细胞和未转染的A10细胞，500 μMMn<2+>均可引起一个明显的荧光淬灭，最大的淬灭率分别为15.3±2.4﹪和37.6±4.0﹪(n=6，P<0.01)，两者之间有显著性差异。 结论： 1 siRNA沉默 ClC-3氯通道后可以抑制C1C-3蛋白表达，也可以引起A10细胞的基础[Ca<2+>]i水平降低。 2 siRNA沉默ClC-3氯通道后可以引起OAG、TG、Phe诱导的Ca<2+>内流降低。 3 siRNA沉默C1C-3氯通道后可以显著抑制ROCC Ca<2+>内流通路，也可显著抑制soccCa<2+>内流通路。