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研究目的:通过研究电针、电针和吗啡结合治疗对胫骨癌痛大鼠痛觉敏化的作用,及对脊髓背角星形胶质细胞活化的标记物:胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、星形胶质细胞产生和释放的神经活性物质:神经生长因子(NGF)、致炎性细胞因了:白细胞介素1(IL-1β)和伤害性神经元激活的标志物:c-fos蛋白的影响,旨在探讨电针与星形胶质细胞活化相关可能的中枢镇痛机制,为临床电针及针药结合缓解癌症疼痛提供实验依据。 研究方法:健康的SPF级雌性Wistar大鼠60只,体质量150士10g,随机取12只作为假手术组,余48只造模后随机分为模型组、电针组、吗啡组、电针吗啡组,每组12只。大鼠右侧胫骨上段骨髓腔注入4μL Walker256大鼠乳腺癌腹水瘤细胞建立胫骨癌痛模型,假手术组大鼠注入Hanks液作为对照。造模后第15d开始治疗组大鼠给予药物和/或电针治疗,每天1次,连续6d。药物治疗在大鼠腹部皮下注射吗啡,5 mg/kg吗啡用0.25 mL生理盐水稀释;电针治疗取大鼠背部双侧L3~L5夹脊穴(Jiaji,Ex-B2),在大鼠L3棘突下旁开约0.3 cm直刺进针,沿棘突旁平行透刺至L5,针灸针连接韩氏穴位神经刺激仪电极,2/100 Hz疏密波,电流强度2mA,30 min电针。5组均于造模后第15d治疗前,造模后第20 d治疗后,检测各组大鼠痛阈。痛阈检测后取大鼠脊髓L4~L5节段,分别用荧光免疫组化法和Western Blot法测定大鼠脊髓GFAP、IL-1β、NGF、和c-fos蛋白表达。 研究结果:大鼠胫骨癌造模后第15d治疗前和第20 d治疗后体重比较,模型组、吗啡组、电针组和电针吗啡组均低于假手术组,第20d治疗后电针吗啡组高于吗啡组;大鼠胫骨癌造模后第15d治疗前和第20d治疗后,模型组、吗啡组、电针组与电针吗啡组大鼠的痛阈均低于假手术组,经6次治疗后,吗啡组、电针组和电针吗啡组大鼠的痛阈均高于模型组,吗啡组与电针组的痛阈均低于电针吗啡组,且差异有统计学意义,但两者比较差异无统计学意义。Western blot灰度值分析比较:大鼠胫骨癌造模后第20 d,6次治疗后,模型组脊髓背角星形胶质细胞活化的标记物GFAP表达大量增加,明显高于假手术组,且电针组和电针吗啡组的GFAP表达要显著低于模型组,说明治疗能抑制星形胶质细胞的活化;模型组IL-1β和 NGF均高于假手术组,吗啡组、电针组和电针吗啡组IL-1β均低于模型组,电针组和电针吗啡组NGF表达均低于模型组;各组c-fos表达的差异无统计学意义;且大鼠脊髓IL-1β与GFAP,NGF与GFAP的表达均呈正相关。荧光免疫组化法测定结果:大鼠胫骨癌造模后第20 d,6次治疗后,假手术组脊髓中星形角质细胞活化的标志物GFAP少量表达,模型组GFAP则显著大量表达,两者IOD值比较差异有统计学意义,电针组、电针吗啡组低于模型组;荧光双标免疫组化结果:模型组L4~L5脊髓背角GFAP与IL-1β有大量荧光免疫共表达,电针组、吗啡组和电针吗啡组GFAP和IL-1β共表达较模型组明显减少。说明胫骨癌痛大鼠脊髓背角星形角质细胞活化的同时伴有炎性物质IL-1β的表达上调,脊髓中IL-1β的分泌可能与星形胶质细胞的活化存在密切相关。 结论: 1.电针吗啡组缓解胫骨癌痛大鼠的痛觉敏化效果要优于单纯的吗啡或电针治疗。 2.大鼠胫骨癌痛模型中脊髓背角GFAP大量表达,且产生和释放了大量致炎性细胞因子IL-1β,并伴有脊髓背角NGF的表达上调,电针和针药结合可能通过抑制脊髓背角GFAP的表达,达到治疗大鼠胫骨癌痛的目的。