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酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,英文缩写CGMP)是一种具有生物活性的高纯度乳清蛋白。它是与乳过氧化物酶、乳铁蛋白及蛋白水解酶、胨等共存于乳清中的微量蛋白质。酪蛋白糖巨肽是在干酪生产过程中,凝乳酶分解乳中κ-酪蛋白后释放的一种c-末端亲水性糖肽。干酪乳清是酪蛋白糖巨肽工业化生产的理想原料,但由于乳糖、乳清蛋白及灰分的存在而使其大规模生产存在一定的技术困难。基于酪蛋白糖巨肽耐热性及其聚合体与单体分子量的不同,改进分离方法旨在保证大规模生产的产量与较高的纯度。本实验以市售乳清粉为原料,还原后采用超滤的方法分离制备酪蛋白糖巨肽,通过控制超滤的温度、时间、压力等条件,得到最佳超滤控制参数。酪蛋白糖巨肽同时也是一种具有多种营养及医疗功用的生物肽,实验室通常用凝乳酶消化κ-酪蛋白去除κ-酪蛋白片断以制备酪蛋白糖巨肽。酪蛋白糖巨肽用超滤和离子交换的方法从酪蛋白酸盐水解液中分离出来已有报道,用凝胶色谱法分离的相应信息却很少。本实验采用Sephadex G-100凝胶对超滤后得到的酪蛋白糖巨肽混合物进行纯化,本实验对凝胶柱尺寸、洗脱液、洗脱液流速等进行了研究,经后续鉴定,结果表明纯化效果明显。最后用SDS-尿素凝胶电泳和氨基酸分析仪对纯化后的酪蛋白糖巨肽分子量和含量进行定量分析,结果表明,酪蛋白糖巨肽的平均分子量为31637,和已报道的糖巨肽分子量32000相吻合;CGMP 占乳清蛋白总量的22.35%;超滤法分离CGMP 效果较明显,CGMP 占超滤冻干粉总蛋白含量的58.91%,冻干粉中CGMP 蛋白含量为乳清粉中CGMP 含量的2.6 倍。Sephadex G-100 纯化CGMP 效果显著,但也有不足之处,经Sephadex G-100 纯化的CGMP并不是百分之百的纯物质,其中还含有一部分杂蛋白/肽,可能由于其分子量和分子空间结构和CGMP 相近,凝胶层析和电泳的方法都没办法很好的分离,而凝胶扫描软件认为电泳图中1 泳道和2 泳道只含有一种物质。因此,这也提示我们,对一种蛋白的分子量和含量进行测定时,多种实验方法的测定可以提高测定的准确度和精确度,根据蛋白分子量,等电点,疏水性,热稳定性不同等特点,选择多种分离、纯化方法,可以得到纯度较高的目的蛋白。