瑞替加滨对缺血性脑卒中模型大鼠星形胶质细胞及Caspase-3的表达影响

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目的通过Longa5方法比较神经功能缺损评分,TTC染色法测量脑梗死体积变化,应用免疫组化检测星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达细胞(即星形胶质细胞)数和细胞凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)阳性表达细胞数。探讨瑞替加滨对脑梗死大鼠GFAP、Caspase-3表达水平的影响,进而探讨瑞替加滨(Retigabine RTG)对缺血性脑卒中模型大鼠的保护作用及机制。方法选取SD大鼠75只,随机分为假手术组(15只,Sham组),模型组(15只,MCAO组),干预组(45只,RTG组)。干预组按照梗死再灌注后给药时间的不同又分为RTG 0h组;RTG 1h组;RTG 3h组,各组15只。通过大鼠尾静脉给药。给药剂量:RTG(10mg/kg)。假手术组和模型组不做任何处理,仅给予等量生理盐水。制备经典的大脑中动脉缺血再灌注模型大鼠,Longa5方法比较神经功能缺损评分,应用经典的TTC染色法测量脑梗死体积的变化;免疫组化法观察脑缺血后再灌注三组大鼠脑组织皮层GFAP、Caspase-3表达变化,显微镜下计数阳性细胞数。应用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,结果用均数±标准(`X±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法或SNK法。P<0.05认为差异有统计学意义。结果1神经功能缺损评分:假手术组未出现神经功能缺损症状,模型组组均表现出一定程度的神经功能缺损症状,表现为:或身体蜷缩,或身体平衡能力差,向左侧旋转及倾倒,或不能行走等。与模型组相比,RTG干预组神经功能缺损症状评分明显降低(P<0.05),表现为单一的神经功能缺损症状,或者合并两种神经功能缺损症状,但RTG不同作用时间各亚组间差异无统计学意义。2 TTC染色:TTC图像显示:假手术组未见缺血梗死灶;模型组脑组织可见不同程度的梗死灶。RTG 0h、1 h、3 h干预组梗死灶较模型组明显降低(P<0.05),但RTG不同作用时间各亚组间差异无统计学意义。3免疫组化:免疫组化检测假手术组可见少量GFAP及细胞凋亡Caspase-3阳性细胞的表达;干预组的GFAP、细胞凋亡Caspase-3表达均较模型组明显减少(P<0.05),但干预组不同作用时间各亚组间差异无统计学意义。结论1瑞替加滨能明显降低脑梗死大鼠神经功能学评分,减少脑梗死体积。2瑞替加滨减少大鼠脑梗死中GFAP、细胞凋亡Caspase-3的表达,对大鼠缺血性脑卒中具有保护作用,其作用机制可能是瑞替加滨能够在细胞去极化时持续使大量钾离子外流抑制神经元的兴奋性,使神经细胞的兴奋性明显降低,减少谷氨酸的释放,从而进一步减轻脑梗死周围区的炎症反应,也抑制神经元的细胞凋亡,但时间依赖性有待研究。
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