为了将来能构建一种血供丰富、成骨能力及骨块存活能力更强的组织工程化人工颅骨用于颅骨缺损的治疗,我们计划采用基因治疗的方法,这就需要我们进行外源基因选择、导入、表达以及种子细胞选择、体外培养等方面的一系列相关实验研究。为此本实验采用了血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因作为外源基因,五种亚型之一的VEGF165 基因第一个外显子含有的信号肽序列能使VEGF 蛋白从细胞内完整分泌出来,其强烈的促进血管内皮细胞生长、启动血管形成和增加血管通透性的特性正是我们将来构建富含血管的组织工程人工颅骨所必须的。为了能在体外有效的分泌VEGF 蛋白,我们使用骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,MSCs 具有取材方便、扩增迅速、可自体移植、外源基因易于导入和表达等特点,并使用安全无毒、操作简便、广泛高效的阳离子脂质体介导重组真核表达载体pcDNA3-VEGF165转染MSCs。在进行了重组质粒的扩增、提取、纯化、鉴定、兔MSCs的原代及传代培养以及RT-PCR、Western Blot 转染检测后,实验取得了令人满意的结果,证实了MSCs 能在体外有效转录外源VEGF 基因并分泌出VEGF 蛋白,同时也说明pcDNA3-VEGF165重组真核表达质粒是有效的。